沙眼衣原体LpxA蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的纯化沙眼衣原体LpxA蛋白并制备抗LpxA蛋白的多克隆抗体,为研究LpxA蛋白的功能奠定基础。方法 PCR扩增LpxA基因,以pET28a质粒为载体,构建表达质粒pET28a-LpxA,转化大肠埃希菌BL21,利用IPTG诱导含有6*His的融合蛋白表达,并使用Ni 2+亲和层析柱进行纯化。以纯化的His-LpxA蛋白作为免疫原,经背部皮下免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,并使用免疫印迹法检测抗体与His-LpxA蛋白的反应以及使用ELISA法测定多克隆抗体的滴度。结果重组表达质粒pET28a-LpxA构建成功,融合His-LpxA蛋白的相对分子质量为32.8kDa,能够在大肠杆菌中高效表达,纯化后目的蛋白纯度约为95%,免疫新西兰兔后,抗血清能够识别重组的His-LpxA蛋白,其滴度大于1∶10 240。结论成功纯化了LpxA蛋白和制备了抗血清,为研究LpxA蛋白的功能提供实验基础。