Slit2/Robo4信号通路在输血相关急性肺损伤体外模型中的表达及作用

目的探讨Slit2/Robo4信号通路在输血相关急性肺损伤（TRALI）体外模型中的表达及作用。 方法采用两次打击多形核中性粒细胞（PMNs）介导的人肺微血管内皮细胞（HMVECs）损伤模型作为TRALI体外模型，培养0、0.5、1、2、4、6 h后，采用Western-blotting法检测Robo4和血管内皮细胞钙粘连蛋白（VE-cadherin）表达，反转录酶PCR（RT-PCR）检测Robo4和Slit2信使RNA（mRNA）表达，体外内皮细胞通透性实验测定HMVECs通透性。加入不同浓度Slit2-N（0、0.5、1、4、10、20 μg/L）与HMVECs一起温孵24 h后，检测HMVECs完整性和通透性。 结果在TRALI体外模型中，Robo4和Slit2 mRNA的表达在各时间点的比较，差异均有统计学意义（F=12.880、11.060，P均< 0.001）；两者在2 h（0.72 ± 0.04、0.78 ± 0.05）、4 h（0.49 ± 0.04、0.49 ± 0.06）和6 h（0.34 ± 0.03、0.43 ± 0.11）均显著低于0 h（1.29 ± 0.06、1.40 ± 0.09），差异均有统计学意义（P均< 0.05）。Robo4蛋白表达在各时间点的比较，差异有统计学意义（F=11.560，P < 0.001）；其在2、4和6 h（0.99 ± 0.04、0.66 ± 0.03、0.45 ± 0.04）均显著低于0 h（1.44 ± 0.04），差异均有统计学意义（P均< 0.05）。同时发现，VE-cadherin蛋白表达在各时间点的比较，差异也有统计学意义（F=9.667，P < 0.001）；与0 h（1.46 ± 0.09）比较，VE-cadherin的表达在2、4和6 h（0.91 ± 0.08、0.78 ± 0.05、0.50 ± 0.04）也均有减少，差异均有统计学意义（P均< 0.05）。体外内皮细胞渗透性试验提示，HMVECs通透性在各时间点的比较，差异有统计学意义（F=21.940，P < 0.001）；与0 h（1.42 ± 0.16）比较，HMVECs通透性在2、4、6 h（4.00 ± 0.35、5.70 ± 1.71、10.02 ± 2.24）均有增加，差异均有统计学意义（P均< 0.05）。加入外源性Slit2-N后，VE-cadherin蛋白表达的比较，差异有统计学意义（F=13.220，P < 0.001）；与0 μg/L Slit2-N组（0.41 ± 0.08）相比，VE-cadherin在4、10、20 μg/L Slit2-N组表达（1.19 ± 0.35、1.49 ± 0.13、2.12 ± 0.21）均有增加，差异均有统计学意义（P均< 0.05）。体外内皮细胞渗透性实验提示，HMVECs通透性比较，差异有统计学意义（F=19.430，P < 0.001）；与0 μg/L Slit2-N组（10.0 ± 2.2）相比，HMVECs通透性在4、10、20 μg/L Slit2-N组（4.2 ± 1.1、2.1 ± 0.7、1.8 ± 0.8）均有降低，差异均有统计学意义（P均< 0.05）。 结论Slit2/Robo4信号通路可能参与TRALI的病理生理过程；使用外源性Slit2-N能调节TRALI体外模型中HMVECs的完整性和通透性，为治疗TRALI提供新的思路。

Expression and effect of Slit2/Robo4 signaling pathway in vitro model of transfusion related acute lung injury