脂氧素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激反应的影响

目的 探讨脂氧素对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞氧化应激反应的影响.方法 切取正常妊娠剖宫产手术4 h内的新生儿脐带,从中分离出脐静脉内皮细胞并进行传代培养,将培养的脐静脉内皮细胞分成4组:空白对照组,脂多糖处理组(10 μg/ml脂多糖),脂多糖+脂氧素处理组(10μg/ml脂多糖+100 nmol/L脂氧素),脂氧素处理组(100 nmol/L脂氧素).分别作用12 h和24 h后进行检测.采用免疫细胞荧光法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达及核转位情况、内皮细胞特异性Ⅷ因子的表达;采用逆转录(RT)PCR检测Nrf2、血红素加氧酶(HO)1和还原型辅酶Ⅰ醌类氧化还原酶(NQO1)mRNA的表达.结果 (1)荧光显微镜下观察到脐静脉内皮细胞胞质内有黄绿色荧光反应,证实有内皮细胞特异性Ⅷ因子抗原存在.(2)免疫细胞荧光染色显示,空白对照组内皮细胞中Nrf2大部分表达在胞质,胞核内基本不表达.12 h后,脂多糖处理组Nrf2胞核内的表达增加,出现了由胞质向胞核的转位;但24 h后,Nrf2在胞质和胞核内的表达都明显下降.脂多糖+脂氧素处理组在12 h和24 h,Nrf2在胞质和胞核中的表达均明显高于脂多糖处理组;脂氧素处理组Nrf2大部分表达在胞质中.(3)脂多糖处理组和脂多糖+脂氧素处理组在12 h后,Nrf2和HO-1 mRNA表达水平分别为0.581±0.019、0.081±0.009及0.692±0.048、0.136±0.018,均明显高于空白对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂多糖处理组在12 h后,NQO1 mRNA表达为0.381±0.009,虽高于空白对照组的0.355±0.044,但差异无统计学意义(P＞0.05),而脂多糖+脂氧素处理组NQO1 mRNA表达为0.574±0.034,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);脂多糖处理组24 h后,Nrf2和NQO1 mRNA的表达水平分别为0.180±0.017、0.472±0.064,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂多糖+脂氧素处理组Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA的表达均较脂多糖处理组明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂氧素处理组Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达水平无论12 h还是24 h,与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 脂氧素通过激活脐静脉内皮细胞胞质内的Nrf2,使其向胞核内转位,进而上调Nrf2下游对细胞有保护作用的抗氧化酶,如HO-1、NQO1,抑制脂多糖诱导的氧化应激,从而保护脐静脉内皮细胞免受损伤.

Effect of lipoxin A(4) on lipopolysaccharide-induced oxidant stress in human umbilical vein endothelial cells