缺氧对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及葡萄糖摄取和Akt表达的影响

目的探讨缺氧对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）糖摄取、凋亡、增殖和Akt表达的影响。方法将接种的P3细胞置于94%N2、1%O2和5%CO2缺氧箱中37℃孵育不同时间点（常氧、缺氧0.5、1、2、4和8h）后分别取出,应用放射同位素法检测MSCs对氚标记-葡萄糖（^3H-G）的摄取,应用Annexin V/PI双染法进行流式细胞仪（FCM）分析MSCs凋亡率（apoptotic rate,AR）和死亡率（dead rate,DR）,应用MTT分析细胞增殖状态以及检测Akt蛋白表达。结果培养的P3骨髓单个核细胞CD29^＋、CD71^＋、CD44^＋、CD34^-和5-aza诱导后表达TnT及骨诱导分化液诱导后细胞ALP^＋等证实其为骨髓MSCs;各缺氧时间点^3H-G摄取量较缺氧前均显著性降低（P〈0.01）,而各缺氧时间点之间没有统计学意义（P〉0.05）;MSCs常氧、缺氧0.5、1、2、4、6和8h时的AR均较缺氧前显著增高（P〈0.01）、DR亦显著增高（P〈0.05）,不过,随着缺氧时间延伸,AR显著增加（P〈0.05）,而DR没有统计学意义（P〉0.05）;缺氧不同时间点MTT法OD值较常氧（缺氧结束同步时间点）均显著性降低（P〈0.01）,并随缺氧时间延伸显著降低（P〈0.05）,不过,与常氧（缺氧8h开始同步时间点）相比,均显著升高（P〈0.05）;与常氧相比,各缺氧时间点Akt蛋白IOD均显著增强（P〈0.05）,而各缺氧时间点改变无统计学意义（P〉0.05）。结论缺氧既可引起MSCs摄糖量下降、增殖滞缓,又可上调Akt蛋白表达和促进MSCs凋亡。

Cell multiplication, apoptosis, glucose intaking and Akt protein expression of bone marrow mesenchymal stem cells of rat under hypoxia environment