| 真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达术 |
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| 引用本文： | 陈杰 高下 朱敏生 张文程 麻晓峰 顾香芳. 真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达术[J]. 中国现代医学杂志, 2007, 17(18): 2211-2214 |
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| 作者姓名： | 陈杰 高下 朱敏生 张文程 麻晓峰 顾香芳 |
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| 作者单位： | [1]南京大学医学院附属南京市鼓楼医院耳鼻咽喉科,江苏南京210008 [2]南京大学模式动物研究所,江苏南京210061 |
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| 基金项目： | 南京市医学重点科技发展项目资助（编号：ZKX0207） |
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| 摘 要： | 目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1，并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板，经PCR获得Hath1-cDNA，将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoI、EcoRI双酶切，酶切产物琼脂糖凝胶电泳，割胶纯化，前者回收1065bp片断，后者回收大片断，再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接，转化感受态DH5q细胞，挑选单克隆，提取质粒，将所提取的质粒双酶切鉴定并测序。再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体Lipofectarnine^TM2000转染HEK293T细胞，观测其转染情况和目的基因的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1，该质粒能有效地转染HEK293T细胞，目的基因能有效表达。结论pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础。
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| 关 键 词： | Hath1 基因克隆 真核表达载体 脂质体 |
| 文章编号： | 1005-8982（2007）18-2211-04 |
| 收稿时间： | 2007-03-10 |
| 修稿时间： | 2007-03-10 |
Constructing pIRES2-DsRed2-Hath1 and its expression in HEK293T |
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| CHEN Jie, GAO Xia, ZHU Min-sheng, ZHANG Wen-cheng, MA Xiao-feng, GU Xiang-fang. Constructing pIRES2-DsRed2-Hath1 and its expression in HEK293T[J]. China Journal of Modern Medicine, 2007, 17(18): 2211-2214 |
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| Authors: | CHEN Jie GAO Xia ZHU Min-sheng ZHANG Wen-cheng MA Xiao-feng GU Xiang-fang |
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| Affiliation: | 1.Department of Otorhinolaryngology, Gulou Hospital, Medical College of Nanjing University, Nanjing, Jiangsu 210008, P.R.China; 2.Model Animal Research Center, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu 210061, P.R.China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hath1 gene clone eukaryotic expression vector cationic liposome |
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