survivin反义寡核苷酸转染肝癌细胞可诱导caspase-3活化

目的:观察survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AS ODN)诱导肝癌细胞凋亡的可能途径。方法:培养survivin表达阳性的肝癌细胞株SMMC-7721。设计合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸。将SMMC-7721细胞接种于6孔培养板内,分为6组:①空白对照组;②脂质体转染对照组;③正义链转染对照组;④200nmol/L AS ODN转染组;⑤400nmol/L AS ODN转染组;⑥600nmol/L AS ODN转染组。作用20小时后收获各组细胞,并进行后续实验:①倒置显微镜下观察细胞形态变化;②western blot法检测各组细胞survivin蛋白的表达情况;③流式细胞术检测细胞增殖和凋亡指数;④比色法检测各组细胞caspase-3的活性变化。结果:①AS ODN转染组细胞survivin表达减弱,以600nmol/L转染组最为明显,各对照组survivin蛋白表达无明显改变;②AS ODN转染组细胞形态出现变圆、折光增强、漂浮、细胞碎片形成等变化,而各对照组细胞生长良好;③各AS ODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/L转染组最为明显,而各对照组间差异无显著性意义(P>0.05);④各AS ODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05),以600nmol/L转染组最为明显,而各对照组间差异无显著性意义;⑤在各AS ODN转染组中,可见到不同程度的caspase-3的活化,而对照组细胞内无明显的变化。结论:survivin AS ODN转染能下调survivin蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,其作用途径可能涉及抑制survivin表达,诱导caspase-3活化,启动凋亡信号传导。

Antisense oligonucleotide targeting survivin transfecting the hepatocellular cell could induce the activity of caspase-3