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酵母双杂交研究小鼠肝脏再生TGF-β调控通路中相关转录因子的相互作用
引用本文:谢超,王方圆,袁运生,郜尽,朱润芝,韩伟,俞雁.酵母双杂交研究小鼠肝脏再生TGF-β调控通路中相关转录因子的相互作用[J].上海交通大学学报(医学版),2011,31(5).
作者姓名:谢超  王方圆  袁运生  郜尽  朱润芝  韩伟  俞雁
作者单位:谢超,袁运生,俞雁,XIE Chao,YUAN Yun-sheng,YU Yan(上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室,上海,200240);王方圆,WANG Fang-yuan(上海交通大学医学院附属中国福利会国际和平妇幼保健院中心实验室,上海,200030);郜尽,韩伟,GAO Jin,HAN Wei(上海交通大学药学院,上海,200240);朱润芝,ZHU Run-zhi(中国药科大学,江苏省肿瘤发生与干预重点实验室,南京,210009)
基金项目:国家高技术研究发展计划("八六三"计划)
摘    要:目的 采用酵母双杂交系统研究肝脏再生调控途径转化生长因子β(TGF-β)信号通路中4种转录因子的相互作用.方法 经CCl4腹腔注射诱导建立小鼠肝损伤再生模型,提取模型小鼠肝脏组织总RNA作为模板,经RT-PCR获得cDNA.经肝脏再生基因芯片检测显示差异表达且与TGF-β信号通路相关的激活转录因子3(ATF3)、DNA结合抑制因子3(ID3)、DNA损伤诱导的转录因子3(DDIT3)和LIM蛋白家族成员FHL2(FHL2)作为候选基因,进行基因克隆和载体构建,PCR及DNA测序鉴定.采用酵母双杂交系统进行自激活检测实验和酵母双杂交实验,观察ATF3、FHL2、DDIT3和ID3之间的相互作用.结果 PCR及DNA测序鉴定表明,ATF3、FHL2、DDIT3、ID3基因克隆与载体构建成功.自激活检测显示ATF3、FHL2、DDIT3和ID3不存在自激活现象;酵母双杂交实验发现7对蛋白互作,分别为ID3/ATF3、FHL2/ATF3、ATF3/ATF3、FHL2/FHL2、ID3/FHL2、ID3/ID3和ID3/DDIT3.结论 ATF3、FHL2和ID3间的蛋白互作可能对TGF-β信号通路具有调控作用;蛋白互作网络可作为肝损伤再生机制研究的途径之一.

关 键 词:肝脏再生  转录因子  酵母双杂交系统  蛋白互作
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