| 重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定 |
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| 引用本文： | 王胜芬,韩佩珍,穆传杰,赵明辉,卢圣栋. 重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定[J]. 中国现代医药杂志, 2008, 10(3): 8-11 |
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| 作者姓名： | 王胜芬 韩佩珍 穆传杰 赵明辉 卢圣栋 |
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| 作者单位： | 1. 中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所核医学室,天津市分子核医学重点实验室,天津,300192
2. 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所 |
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| 摘 要： | 目的 表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性.方法 从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实.将目的 序列(18-247氨基酸)亚克隆至pET-32(a)表达载体,重组质粒adiponectin/pET32(a)的序列经测序证实.将adiponectin/pET32(a)转化表达宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达目的 蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的 蛋白经组氨酸镍螫和树脂亲和纯化.以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性.结果 小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被C置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代.序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达.表达产物的相对分子量(Mr)同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43 000,Trx Mr为19 000.在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖.结论 小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同.成功地在E.coli中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性.
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| 关 键 词： | 重组脂联素 融合蛋白 可溶性 生物学活性 重组表达载体 脂联素基因 融合蛋白 形式表达 生物学活性测定 adiponectin recombinant fusion protein Expression activity biology identification coli 脂肪细胞 脐静脉内皮细胞增殖 刺激 相对分子量 预期 包含体 可溶性 工程菌 |
| 修稿时间： | 2007-12-20 |
Expression of recombinant fusion protein of adiponectin in E.coli and identification of its biology activity |
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| Wang Shengfen,Han Peizhen,Mu Chuanjie,et al.. Expression of recombinant fusion protein of adiponectin in E.coli and identification of its biology activity[J]. Modern Medicine Journal of China, 2008, 10(3): 8-11 |
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| Authors: | Wang Shengfen Han Peizhen Mu Chuanjie et al. |
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| Affiliation: | Wang Shengfen,Han Peizhen,Mu Chuanjie,et al. Department of Nuclear Medicine,Institute of Radiation Medicine,Chinese Academy of Medical Sciences,Tianjin 300192 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Recombinant adiponectin Fusion protein Solubility Bioactivity |
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