基于Wnt/β-catenin大鼠心肌损伤的修复作用通路探讨益气活血方对急性心肌梗死

【目的】 探讨益气活血方对急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌损伤的修复作用及机制。【方法】 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、Wnt-C59（Wnt/β-catenin信号通路抑制剂）组，每组15只。模型组、中药组、Wnt-C59组大鼠采用冠状动脉前降支结扎法建立 AMI 模型，假手术组大鼠仅打开胸腔后缝合。成功造模后，中药组大鼠灌胃益气活血方药液6.48 g·kg-1·d-1，Wnt-C59组大鼠灌胃Wnt-C59 30 mg·kg-1·d-1，假手术组和模型组大鼠灌胃0.9% 氯化钠（NaCl）溶液20 mL·kg-1 ，共4周。给药结束后，评价大鼠心功能变化，采用苏木素-伊红（HE）法和Masson染色法观察大鼠心肌组织病理学改变，脱氧核苷酸末端转移酶（TdT）介导的核苷酸（dUTP）缺口末端标记法（TUNEL）染色检测心肌细胞凋亡情况，实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（RT-qPCR）法检测心肌组织半胱氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）、B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）mRNA表达，酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清心肌损伤指标乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）、CK同工酶（CK-MB）的含量，蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测心肌组织 Wnt3a、β-catenin 及 β-catenin 靶基因细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）、C-myc蛋白表达水平。【结果】 与正常组比较，模型组大鼠心功能显著降低，出现明显心室扩张和重构，心肌组织排列紊乱、纤维化明显、细胞凋亡增加，Caspase-3、Bax mRNA表达水平上调，Bcl-2 mRNA表达水平下调，血清心肌损伤因子含量显著升高，心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，中药组和Wnt-C59组大鼠心功能指标得到显著改善，心肌组织排列较为整齐，胶原纤维沉积减少，细胞凋亡减少，Caspase-3、Bax mRNA表达水平降低，Bcl-2 mRNA表达水平增加，血清心肌损伤因子含量降低，心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平降低（P＜0.05）。【结论】 益气活血方可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善AMI大鼠心肌损伤。