| SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化 |
| |
| 引用本文： | 雷明军 吴少庭 戴五星 秦莉 潘晖榕 袁仕善 黄达娜 高世同 张仁利 林绮萍. SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化[J]. 中国人兽共患病杂志, 2005, 21(12): 1100-1102,1067 |
| |
| 作者姓名： | 雷明军 吴少庭 戴五星 秦莉 潘晖榕 袁仕善 黄达娜 高世同 张仁利 林绮萍 |
| |
| 作者单位： | [1]华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系,武汉430030 [2]深圳市疾病预防控制中心分子生物室,深圳518020 [3]华南农业大学动物医学系,广州510089 |
| |
| 摘 要： | 目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列，构建原核重组表达质粒pET23a-M，并在大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达、纯化。表达产物用Western Blot检测其抗原性。方法RT-PCR扩增M编码基因目的片段，胶回收纯化，插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DHSa。序列测定后亚克隆至表达质粒载体pET23a，构建重组体pET23a-M，转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆，以限制性酶切分析鉴定后，转化大肠杆菌BL21（DE3）以异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达。用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物。结果PCR扩增出约675bp的特异性片段，与预期片段大小相符，测序鉴定无有义突变；所构建的pET23α-M重组体阳性克隆经PCR与双酶切鉴定，与预期结果一致；SDS-PAGE显示表达产物约27kD；表达产物经金属螯和层析纯化；免疫印迹表明表达产物能被混合的SARS病人恢复期血清识别。结论成功克隆了SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列，构建了pET23α-M表达质粒，诱导表达并纯化出了SARS冠状病毒M蛋白，并以免疫印迹鉴定。本研究的成功为进一步进行SARS病毒诊断试剂与疫苗的开发奠定了基础。
|
| 关 键 词： | SARS M蛋白 基因表达 蛋白纯化 免疫印迹 |
| 文章编号： | 1002-2694（2005）12-1100-03 |
| 收稿时间： | 2005-01-27 |
| 修稿时间： | 2005-01-272005-05-16 |
Cloning,expression and purification of the M gene from SARS Coronavirus |
| |
| LEI Ming-jun, WU Shao-ting, DAI Wu-xing, QIN Li , PAN Hui-rong, YUAN Shi-shan, HUANG Dana, GAO Shi-tong, ZHANG Ren-li, LIN Qi-ping. Cloning,expression and purification of the M gene from SARS Coronavirus[J]. Chinese Journal of Zoonoses, 2005, 21(12): 1100-1102,1067 |
| |
| Authors: | LEI Ming-jun WU Shao-ting DAI Wu-xing QIN Li PAN Hui-rong YUAN Shi-shan HUANG Dana GAO Shi-tong ZHANG Ren-li LIN Qi-ping |
| |
| Affiliation: | Tongji Medical college of Huazhong University, Wuhan 430030, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | SARS membrane protein gene expression protein purification western bolt |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
