22种氨基酸衍生化串联质谱高通量检测方法的建立及其在遗传代谢病中的应用

目的 建立高通量快速检测全血中22种氨基酸的衍生化串联质谱法,考察该方法的影响因素及其在遗传代谢病筛查中的应用和意义.方法 新生儿采足后跟血、儿童采末梢血于空白采血滤纸上,完全渗透,晾干.用已知浓度的氨基酸同位素内标液萃取干血滤纸片中的22种氨基酸,衍生化20 min,建立衍生化串联质谱法,高通量快速检测全血中22种氨基酸,采用方差分析优化其影响因素,分析2869例2014年5月至2018年1月西部5省部队在空军军医大学第一附属医院自愿选择衍生化串联质谱法筛查遗传代谢病的3 d至1岁新生儿及儿童的干血滤纸片.结果 建立衍生化串联质谱法高通量快速检测全血中22种氨基酸并优化了该方法的影响因素:使用新鲜末稍血,标本4℃保存不超过2周,内标液4℃保存有效期为1个月左右,氮气最佳吹干时间为20 min.衍生化串联质谱法定量检出限为0.3～10.0μmol/L.批内变异系数为5.3％～7.9％,批间变异系数为7.1％～8.6％.经统计学分析男、女氨基酸浓度差异无统计学意义(P>0.5).加标回收率为96.1％～98.1％,偏倚<10.0％.结论 衍生化串联质谱法高通量快速检测全血中22种氨基酸有较高的回收率、精确性和准确性,可以灵敏、特异地检测全血中22种氨基酸,满足临床对遗传代谢病筛查及诊断的需要.

Establishment of a high throughput method for the determination of 22 amino acids by derivatization tandem mass spectrometry and its application in genetic metabolic disease