BMSCs分泌的miR-125b通过外泌体途径对体外成骨分化的影响 |
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引用本文: | 陈超,李昊天,王槐骏,杨城,李玮民,王春庆.BMSCs分泌的miR-125b通过外泌体途径对体外成骨分化的影响[J].中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志,2023(4):345-353. |
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作者姓名: | 陈超 李昊天 王槐骏 杨城 李玮民 王春庆 |
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作者单位: | 1. 贵州医科大学临床医学院骨外科;2. 贵州医科大学附属医院急诊骨科 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(82060271); |
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摘 要: | 目的 研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)分泌的miR-125b是否通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。方法 提取BMSCs原代,通过流式细胞仪进行其表面抗原(CD45、CD90)的鉴定来确定纯度,分别进行成骨诱导,茜素红染色检测成骨效果;成脂诱导,油红染色检测成脂效果。检测P3代上清液外泌体标志性蛋白CD9、CD63的表达量,电镜下观察确定外泌体提取成功。成骨诱导后的第0、7、14、21天进行qRT-PCR测定外泌体内miR-125b及细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、Runx2的mRNA的表达量。BMSCs侵染miR-125b模拟物及模拟物阴性对照剂,miR-125b抑制剂及其抑制物阴性对照剂,转染后验证转染效率。转染后五组(前四组+生理盐水空白对照组)细胞上清液外泌体提取,提取后与BMSCs共培养,继续成骨诱导48 h, qPCR及蛋白质免疫印迹(Western Blot)分别测定BMSCs细胞ALP、Runx2、miR-125b的表达量。结果 (1)成功分离的BMSCs向成...
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关 键 词: | 骨髓间充质干细胞 外泌体 miR-125b 成骨分化 |
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