人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

目的 研究IL-18结构与功能的关系。方法 用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18（hIL-18）突变体hIL-18D134R。将突变体eDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质，SDS-PAGE证实，表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后，包涵体以2mol／L尿素洗涤，8mol／L尿素溶解，并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞（PBMC）产生干扰素-γ（IFN-γ）及对核因子-κB（NF-κB）的激活能力为指标，检测突变体的生物学活性。结果 构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5n中高效表达，经包涵体洗涤和Sephad G-75柱纯化后，纯度达92％以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19％和23％。结论 在人IL-18的氨基酸序列中，Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。