Hsv—tk、重组人TNF—α融合基因表达载体的构建及瞬时表达

目的：构建pEGFP-TK-TNF-α表达载体，观察其在喉癌细胞Hep-2中的瞬时表达，方法：应用PCR方法对各自的进行扩增并经测序载体pGEM-T-Easy测序，利用逆转录病毒载体PLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK－rhTNF-α并将其亚克隆至pEGFP-N3的EcoRI和BamHI位点间成功构建表达载体pEGFP-TK-rhTNF-α，并在该载体转染人喉细胞Hep-2后观察融合蛋白表达情况，结果：酶切鉴定证实TK－rhTNF-α融合基因片段已克隆到pEGFP-N3的EcoRI和BamHI位点间，并在转染人喉癌细胞Hep-2中观察到TK－rhTNF-α融合基因片段已克隆到pEGFP-N3的EcoRI和BamH1位点间，并在转染人喉癌细胞Hep-2中观察到TK－rhTNF-α融合基因及绿色荧光蛋白的表达。结论：pEGFP-TK-rhTNF-α表达载体便于观察转染细胞中TK－rhTNF-α融合蛋白的表达情况及蛋白定位，为自杀基因联合细胞因子基因疗法提供有利条件。