复制缺陷型人IL-2重组腺病毒的制备与鉴定 |
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引用本文: | 章卫平,曹雪涛,滨田洋文.复制缺陷型人IL-2重组腺病毒的制备与鉴定[J].中华微生物学和免疫学杂志,1998,18(2):152-156. |
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作者姓名: | 章卫平 曹雪涛 滨田洋文 |
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作者单位: | 第二军医大学免疫学教研室,日本癌研究会肿瘤研究所 |
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摘 要: | 目的将人IL-2的重组腺病毒载体与Ad5腺病毒DNA末端肽复合物同源重组,高效制备人IL-2的复制缺陷型重组腺病毒,并进行体外表达和活性检测。方法将含全部编码序列的人IL-2cDNA置于真核表达载体pCIcc的CMV启动子下游,切出含CMV启动子、人IL-2cDNA和SV40polyA信号肽序列的ClaI片段,插入E1区替代的腺病毒载体pAxlow,选择左向转录的人IL-2重组腺病毒载体pAxlcw.CIhIL-2与经EcoT22Ⅰ酶切的Ad5腺病毒DNA-末端肽复合物共转染293细胞;通过同源重组获得人IL-2的复制缺陷型重组腺病毒;体外转染人宫颈癌HeLa细胞、人T细胞淋巴瘤Hut78细胞和原代人皮肤成纤维细胞。结果扩增到的病毒滴度达2.1×109PFU/ml;体外转染的人肿瘤细胞均检测到IL-2的表达(400~2600U/106细胞/24小时)。结论所制备的复制缺陷型重组腺病毒能有效介导人IL-2的基因转移,可望用于肿瘤基因治疗的临床研究。
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关 键 词: | 白细胞介素2 腺病毒载体 基因转移 基因表达 |
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