千草方熏洗对膝骨关节炎大鼠软骨的保护作用及相关机制

【目的】 观察千草方熏洗对膝骨关节炎大鼠软骨蛋白激酶B（Akt）/ 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路表达的影响，探讨千草方熏洗对膝骨关节炎大鼠软骨的保护作用及相关机制。【方法】 将32只SD大鼠随机分成4组，即正常组、模型组、千草方组和透明质酸组，每组8只。除正常组，其他3组大鼠采用改良Hulth法构建膝骨关节炎模型。制模后，千草方组大鼠给予千草方熏洗，透明质酸组大鼠给予关节腔内注射透明质酸，模型组不给予任何治疗。治疗30 d。给药结束后，采用苏木素-伊红（HE）染色法和Masson染色法观察大鼠膝关节软骨组织，行Mankin’s评分，酶联免疫吸附分析（ELISA）检测血清白细胞介素（IL）-6、IL-10和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量，免疫组织化学法检测软骨组织Ki67的表达，蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测软骨组织Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）、糖原合成酶激酶3β（GS3Kβ）、磷酸化GS3Kβ（p-GS3Kβ）和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达。【结果】 与正常组比较，模型组大鼠膝关节软骨细胞排列紊乱，结构不清晰，Mankin’s评分升高（P < 0.05），血清IL-10含量下降，IL-6和TNF-α含量升高（P < 0.05），软骨组织Ki67表达量，p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-GSK3β/GSK3β和CyclinD1的相对表达量均显著减少（P < 0.05）。与模型组比较，千草方组大鼠膝关节软骨表面更加光滑，结构较清晰，软骨基质着色较均匀，Mankin’s评分降低（P < 0.05），血清IL-10含量升高，IL-6和TNF-α含量降低（P < 0.05），软骨组织p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-GSK3β/GSK3β和CyclinD1的相对表达量显著增加（P < 0.05）。【结论】 千草方熏洗能够通过促进Akt/mTOR信号通路活化及软骨细胞增殖来缓解膝骨关节炎。