重组Klotho蛋白对骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转变的影响

目的:探究重组Klotho蛋白对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞表型转变的影响.方法:分离并鉴定小鼠骨髓来源性巨噬细胞,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)转变为巨噬细胞M0,流式细胞术和细胞免疫荧光鉴定细胞,普通光镜观察M0细胞形态.将成熟骨髓来源巨噬细胞细胞M0分成LPS组、LPS+Klotho组和空白组.LPS组用 100ng/mL LPS处理,LPS+Klotho组给与 1 μg/mL Klotho和 100ng/mL LPS+LPS共同处理.RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关分子:M1亚型巨噬细胞相关标志物(IL-1β、IL-6、iNOS)mRNA和M2亚型巨噬细胞相关标记物(Arg-1、IL-10)mRNA表达.Western blotting检测iNOS、Arg-1蛋白表达水平,细胞免疫荧光检测细胞肿瘤坏死因子(TNF-a)和Arg-1蛋白含量.结果:流式细胞术显示骨髓巨噬细胞纯度为98.4％,光镜和细胞免疫荧光显示骨髓巨噬细胞呈现不规则形态.与空白组相比,LPS组IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-a蛋白相对表达量明显提高(P＜0.001).而与LPS组相比,LPS+Klotho组降低Ml亚型巨噬细胞标记物IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-α蛋白相对表达量(P＜0.001),显著提高了M2型巨噬细胞标志物Arg-1、IL-10 mRNA和Arg-1的蛋白的表达(P＜0.001).结论:重组Klotho蛋白可促进骨髓来源性巨噬细胞由Ml表型向M2表型转变.

Effect of recombinant Klotho protein on transformation of Ml-type macrophages from bone marrow to M2-type macrophages