Let-7b-5p靶向ETFA减轻高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的机制研究

目的:探讨Let-7b-5p调控电子转移黄素蛋白A(ETFA)表达对高磷诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响.方法:体外培养VSMCs,分为正常对照组和钙化组.钙化组用含β-甘油磷酸钠(β-GP)的培养基培养14 d诱导VSMCs钙化,通过茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色观察VSMCs钙化情况.分别将Let-7b-5p mimic、Let-7b-5p inhibitor、ETFA siRNA及相应对照转染VSMCs,并诱导细胞钙化.用RT-qPCR法检测细胞Let-7b-5p、ETFA及Runx2表达,Western blotting法检测ETFA和Runx2蛋白表达.双荧光素酶实验验证Let-7b-5p与ETFA的靶向关系.结果:与正常对照组比较,钙化组出现明显的紫红色钙盐结节,Let-7b-5p表达显著下调,ETFA和成骨细胞因子Runx2表达明显上调(均P＜0.05).Pearson相关分析显示,Let-7b-5p与ETFA表达呈负相关关系(r=-0.785,P＜0.001),ETFA与Runx2表达呈正相关关系(r=0.962,P＜0.001).Let-7b-5p mimic能显著降低钙化细胞Runx2和ETFA的表达及ALP活性,而Let-7b-5p inhibitor则相反.Let-7b-5p可靶向调控ETFA表达.沉默ETFA后,钙化VSMCs中ETFA和Runx2表达显著下降,钙盐结节明显减少.结论:Let-7b-5p可通过靶向抑制ETFA的表达抑制高磷诱导的VSMCs钙化.

Let-7b-5p targeting ETFA to inhibit high phosphorus-induced vascular smooth muscle cell calcification