荧光RAA检测小鼠微小病毒的研究和应用

目的 病毒培养、组织学、免疫学及普通PCR方法等在小鼠微小病毒(minute virus of mice, MVM)的检测方面都存在一定的不足，不能满足目前实验动物饲养机构现场检测MVM病毒的需要，因此探索开发一种新的、简单易用，便于现场检测MVM的检测方法具有重要的意义。方法 根据Genbank公布的MVM序列，对MVM高度保守序列区域Ns1基因设计荧光重组酶介导链替换核酸扩增的引物和探针，建立了一种MVM荧光法重组酶介导链替换核酸扩增技术(Real-time RAA)检测方法，对其特异性、室温储存稳定性、灵敏度及临床样本验证方面与qPCR法进行对比分析。结果 荧光RAA法在39℃20 min内即可检测到MVM病毒特异性扩增曲线；其灵敏度为10 copies/μL;与Reo-3、MHV-1、MHV-3、MHV-A59、MHV-JHM病毒均无交叉反应；检测试剂室温储存20 d无明显的扩增性能下降；分别对15份阳性模拟样品进行荧光RAA法与qPCR法的检测比对，结果显示两种方法的符合率为15/15;对两种方法的相关性进行统计学分析，结果显示相关系数R²=0.85,两...