基于重组酶介导等温扩增技术检测人腺病毒4型方法的建立与评价

目的 基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)拟建立一种简单快速的人腺病毒4型(HAdV-4)检测方法。方法 以HAdV-4的六邻体(Hexon)基因为靶标设计特异性引物与探针，利用构建的阳性质粒标准品，在39℃、40℃、42℃条件下进行重组酶介导等温扩增，选出最佳反应温度，并对该方法进行灵敏度、重复性及特异性检测。使用实时荧光RAA测定法检测100份临床样本，并与实时荧光PCR检测结果进行比较，评估HAdV-4实时荧光RAA测定法在临床样本中的检测性能。结果 最终确定了实时荧光RAA扩增最适温度为42℃,该方法检测限为10¹ copies/μL。当质粒标准品浓度为10¹～10⁴ copies/μL时，批内的变异系数均<5%,重复性良好。特异性检测结果显示，该方法可以准确检测HAdV-4而不与其他亚型和其他病原体发生交叉反应。100例临床样本分别使用实时荧光PCR和实时荧光RAA测定法进行检测，两种方法的符合率为100%。结论 本研究开发了一种特异且简便的HAdV-4快速检测方法。