S100A8启动子的克隆及转录活性的检测

目的 构建小鼠S100 A8基因启动子序列的报告基因载体，通过报告基因技术检测在静息、脂多糖（LPS）、PolyI:C及NaASO2等刺激下该段启动子的转录活性。方法 采用PCR从小鼠脾组织基因组DNA扩增S100A8启动子序列(-826～+468)；将其克隆至pDsRed1-1载体上，重组质粒经过PCR、酶切及测序分析正确无误后转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7，荧光显微镜下观察静息、LPS、PolyI:C和NaASO2刺激下红色荧光蛋白表达。结果 正确扩增出小鼠S100A8启动子片段(-826～+468)；成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体，证实该质粒转染RAW 264.7细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光，经LPS、PolyI:C和NaASO2刺激后，红色荧光强度和亮度明显增加。结论 小鼠S100A8启动子(-826～+468)在静息状态下即具有转录活性，炎性、氧化应激刺激后S100A8表达增强；该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建，为进一步研究S100A8的基因表达调控机制打下了良好的基础。