骨髓基质细胞分化状态对腺病毒介导骨形态发生蛋白2表达效应的影响

目的：利用骨形态发生蛋白2腺病毒转染向成骨细胞分化的骨髓基质细胞，在体外观察骨形态发生蛋白2的表达量和反应成骨细胞特性的指标变化。方法：实验于2002-04／12在北京大学第三医院中心实验室进行。6周龄雄性BALB／c小鼠60只用于骨髓基质细胞提取，小鼠骨髓基质细胞分别用Dulbecco改良的Eagle培养基液和骨诱导培养基（含地塞米松10^-8mol／L、L广抗坏血酸50mg／L、β-甘油磷酸钠10mmoL／L Dulbecco改良的Eagle培养基液）培养。①不同量骨形态发生蛋白2腺病毒转染骨髓基质细胞的碱性磷酸酶比活性的比较：取原代培养的骨髓基质细胞，分别加入转染指数25，50．100．200骨形态发生蛋白2腺病毒，以不加骨形态发生蛋白2腺病毒的骨髓基质细胞作为对照。6d后收集细胞，测定碱性磷酸酶活性。②骨髓基质细胞诱导分化后转染骨形态发生蛋白2腺病毒的碱性磷酸酶比活性的比较：实验分5组：骨髓基质细胞组，用Dulbecco改良的Eagle培养基培养9d；骨诱导培养3d组，骨诱导培养3d改用Dulbecco改良的Eagle培养基培养6d；骨诱导培养9d组，骨诱导培养9d；骨诱导培养3d＋骨形态发生蛋白2腺病毒组，骨诱导培养3d，加入转染指数50的骨形态发生蛋白2腺病毒作用6d；骨形态发生蛋白2腺病毒组，用Dulbecco改良的Eagle培养基培养3d，加入同量骨形态发生蛋白2腺病毒作用6d。收集细胞，测定碱性磷酸酶比活性。③骨形态发生蛋白2与骨桥蛋白检测：采用免疫组织化学染色与蛋白印迹方法。实验采用拉丁方设计。结果：应用骨诱导培养基或转染骨形态发生蛋白2腺病毒均使细胞碱性磷酸酶比活性明显增加（P〈0．05）。①不同量骨形态发生蛋白2腺病毒转染骨髓基质细胞碱性磷酸酶比活性的比较：骨形态发生蛋白2腺病毒（转染指数=50）组碱性磷酸酶比活性显著高于骨髓基质细胞组和骨形态发生蛋白2腺病毒（转染指数=25，100，200）组[（7658．53&;#177;1600．32）比（1932．89&;#177;665．30），（4311．53&;#177;1108．89），（5360．90&;#177;1374．61）．划内（2661．86&;#177;653．46）nkat／（g&;#183;L），P〈0．011。②骨髓基质细胞诱导分化后转染骨形态发生蛋白2腺病毒的碱性磷酸酶比活性的比较：骨诱导培养3d＋骨形态发生蛋白2腺病毒（转染指数=50）组与骨形态发生蛋白2腺病毒（转染指数=50）组差异无显著性（P〉0．05），显著高于骨诱导培养3d组和骨诱导培养9d组（P〈0．05）。③骨形态发生蛋白2和骨桥蛋白检测结果：骨诱导培养3d＋骨形态发生蛋白2腺病毒组两指标表达量均最高。结论：单纯用诱导Dulbecco改良的Eagle培养基以及先诱导培养再加入骨形态发生蛋白2腺病毒均可促进骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化，但是骨髓基质细胞用骨诱导培养基作用3d再加入骨形态发生蛋白2腺病毒能分泌表达更多的骨形态发生蛋白2，从而提高了目的基因表达的效应。

Differentiation state of bone marrow stromal cells influences the expression of adenovirus mediated bone morphogenic protein