| 抗半胱氨酸蛋白酶-7核酶的克隆、体外表达与切割活性的研究 |
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| 引用本文： | 张(韦华),谢青,周霞秋,姜山,金由辛. 抗半胱氨酸蛋白酶-7核酶的克隆、体外表达与切割活性的研究[J]. 中华肝脏病杂志, 2004, 12(11): 684-687 |
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| 作者姓名： | 张(韦华) 谢青 周霞秋 姜山 金由辛 |
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| 作者单位： | 1. 200025,上海,第二医科大学附属瑞金医院感染科
2. 中国科学院上海生物化学研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30170850) |
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| 摘 要： | 目的 设计并合成抗小鼠半胱氯酸蛋白酶-7(Caspaso7)的锤头状核酶,并对它们的体外表与体外切割活性进行研究。方法 采用计算机软件对锤头状核酶和小鼠Caspase 7基因的二级结构进行分析,核酶的DNA序列在体外由自动合成仪合成,小鼠Caspase-7日的基因通过RTPCR扩增获得,将核酶基因和caspase-7基因分别克隆入载体pBSKneoU6’和pGEM-T中,通过体外转录得到核酶和caspase-7 mRNA,通过体外切割筛选出具有切割活性的核酶。结果 针对目的基因的333和394位点设计合成了两个核酶：Rz333和Rz394。成功获得caspase-7 mRNA的表达载体PC7及含有核酶的重组质粒PU6Rz333和pU6Rz394,通过体外转录表达出含有caspase7mRNA的987nt的靶mRNA及完整的核酶Rz333(47nt)和Rz394(50nt)。体外切割实验证实Rz333能够定点切割caspase-7mRNA,产生243nt和744nt的切割产物,切割效率为67．98％。Rz394不能切割靶基因。结论 核酶Rz333能够位点特异性的切割caspase-7 mRNA。
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| 关 键 词： | 抗半胱氨酸蛋白酶-7 基因克隆 基因表达 切割活性 小鼠 锤头状核酶 |
| 修稿时间： | 2003-09-25 |
Clone,expression and cleavage activity of anti-caspase-7 hammerhead ribozyme in vitro |
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| ZHANG Wei,XIEQing,ZHOU Xia-qiu,JIANG Shan,JIN You-xin. '. Clone,expression and cleavage activity of anti-caspase-7 hammerhead ribozyme in vitro[J]. Chinese journal of hepatology, 2004, 12(11): 684-687 |
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| Authors: | ZHANG Wei XIEQing ZHOU Xia-qiu JIANG Shan JIN You-xin. ' |
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| Affiliation: | Department of Infectious Diseases, Ruijin Hospital, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025, China. |
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| Abstract: | |
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