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| HSV-tk和H60基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定 | |
| 引用本文： | 卢善明,邓汪东,薛玲.HSV-tk和H60基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定[J].汕头大学医学院学报,2010,23(1):25-28. |
| 作者姓名： | 卢善明 邓汪东 薛玲 |
| 作者单位： | 1. 汕头大学医学院第一附属医院病理科,广东,汕头,515041 2. 汕头大学医学院第一附属医院泌尿外科,广东,汕头,515041 3. 中山大学附属第一医院病理科,广东,广州,510080 |
| 摘 要： | 目的：构建携带自杀基因HSV-tk和免疫相关基因H60的逆转录病毒载体pIRKS-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60。方法；以质粒pUC19-H60为模板，用PCR方法扩增H60基因，并亚克隆至pMD18-T载体，构建中介载体pMD18-H60。双酶切质粒pMD18-H60和tgCMV／HyTK，获得H60和TK基因片段，再克隆至逆转录载体pIRES，构建重组载体pIRES-H60和pIRES-TK。然后把HS0基因片段克隆至载体pIRES-TK，构建重组载体pTK-IRES-H60。转染重组载体至包装细胞PA317进行病毒包装，用病毒液感染NIH3T3细胞，检测病毒液的滴度。结果：测序结果显示PCR扩增的H60基因序列正确，重组载体经PCR和酶切鉴定得到相应的基因片段。经筛选得到稳定的产病毒细胞株PA317／pIRES-H60、PA317／pIRES-TK和PA317／pTK-IRES-H60，病毒滴度分别为8×10^4、1×10^5、7．1×10^4cfu／mL。结论：成功构建逆转录病毒载体pIRES-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60，建立了稳定的病毒细胞株，所产生的假病毒颗粒具备一定的感染力。 |
| 关 键 词： | 自杀基因 NKG2D配体 载体构建 逆转录病毒科 |
Construction and Identification of Recombinant Retrovirus Vectors Containing HSV-tk and H60 Gene |
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| LU Shan-ming,DENG Wang-dong,XUE Ling.Construction and Identification of Recombinant Retrovirus Vectors Containing HSV-tk and H60 Gene[J].Journal of Shantou University Medical College,2010,23(1):25-28. | |
| Authors: | LU Shan-ming DENG Wang-dong XUE Ling |
| Institution: | LU Shan-ming1,DENG Wang-dong2,XUE Ling3(1 Department of Pathology,The First Affiliated Hospital,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China,2 Department of Urinary Surgery,3 Department of Pathology,Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510080,China) |
| Abstract: | Objective:To establish recombinant retrovirus vectors containing suicide gene HSV-tk and immunity associated gene H60.Methods:The H60 gene was amplified from plasmid pUC19-H60 by polymerase chain reaction(PCR),and subcloned to the pMD18-T vector.The DNA fragments of H60 and TK gene derived from plasmid pMD18-H60 and tgCMV/Hytk by restriction endonuclease digestion were cloned to retroviral vector pIRES to establish recombinant retrovirus vectors pIRES-H60 and pIRES-TK.To make recombinant vector pTK-IRES-H60... |
| Keywords: | suicide gene NKG2D ligand vector construction retroviridae |
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