| 促红细胞生成素载体的构建、分离纯化及其活性检测 |
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| 引用本文： | 潘佳欣,高秀峰,赵佳浩,罗亚雄,吴晓婷,李永生. 促红细胞生成素载体的构建、分离纯化及其活性检测[J]. 重庆医学, 2016, 0(28): 3913-3915. DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.28.008 |
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| 作者姓名： | 潘佳欣 高秀峰 赵佳浩 罗亚雄 吴晓婷 李永生 |
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| 作者单位： | 1. 四川大学华西基础医学与法医学院,成都,610065;2. 四川大学化学工程学院,成都,610065 |
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| 摘 要： | 目的 为了进一步考察促红细胞生成素(EPO)的组织保护作用,构建了高效表达人源性EPO (rhEPO)的原核表达载体,并通过小鼠体内实验考察了其捉红细胞生成活性.方法 构建原核表逸载俸pET30b(+)-rhEPO;转化至大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达重组转化子菌株;Ni-NAT亲和层析纯化融合蛋白;利用网织红细胞指数考察融合蛋白在小鼠体内的促红细胞活性.结果 成功构建pET30b(+)-rhEPO重组子;实现了在原核生物中的表达;纯化后的融合蛋白达到了电泳级纯;其相对分子质量与理论值相符,原核表达的融合蛋白能够显著提高小鼠体内网织红细胞数,可溶性融合蛋白和包涵体蛋白比活性分别是应用化学科1 059.63、727.94 U/mg.结论 构建和表达重组载体pET30b(+)-rhEPO,表达的目的蛋白经分离纯化后具有体内生物学活性,为进一步的功能研究奠定基础.
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| 关 键 词： | 红细胞生成素 遗传载体 分离和提纯 活性检测 |
The vector construction,separation, purification and activity detection of human-derived erythropoietin |
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| Pan Jiaxin,Gao Xiufeng,Zhao Jiahao,Luo Yaxiong,Wu Xiaoting,Li Yongsheng. The vector construction,separation, purification and activity detection of human-derived erythropoietin[J]. Chongqing Medical Journal, 2016, 0(28): 3913-3915. DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.28.008 |
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| Authors: | Pan Jiaxin Gao Xiufeng Zhao Jiahao Luo Yaxiong Wu Xiaoting Li Yongsheng |
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| Keywords: | erythropoietin genetic vector isolation and purification activity detection |
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