| 登革2型病毒NS3基因的酵母表达及其免疫反应性的测定 |
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| 引用本文： | 晏辉钧,江丽芳,方丹云,周经姣,郭辉玉.登革2型病毒NS3基因的酵母表达及其免疫反应性的测定[J].免疫学杂志,2005,21(6):482-484,488. |
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| 作者姓名： | 晏辉钧 江丽芳 方丹云 周经姣 郭辉玉 |
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| 作者单位： | 中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,510080;中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,510080;中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,510080;中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,510080;中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,510080 |
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| 摘 要： | 目的克隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因并用酵母真核表达,获得全长的重组NS3蛋白质,为其结构与功能的研究提供条件。方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清液中提取RNA,通过RTPCR扩增NS3基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P.pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut 菌诱导表达,SDSPAGE检测表达产物。结果RTPCR得到1.85kb的NS3基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长NS3基因;Mut 酵母转化菌可分泌表达Mr约78000的蛋白质,与DEN2多抗和登革2型病毒患者恢复期血清的免疫印迹证实它为型特异的重组NS3蛋白质。结论成功将克隆的全长DEN2NS3基因在酵母菌中表达,获得的重组NS3蛋白质具有免疫反应性。
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| 关 键 词： | 登革2型病毒 NS3基因 巴氏毕赤酵母 基因表达 抗体 |
| 文章编号： | 1000-8861（2005）06-0482-04 |
| 收稿时间： | 2004-09-27 |
| 修稿时间： | 2004-09-272004-12-09 |
Expression of full-length DEN2 NS3 gene in Pichia Pastoris and its immunoreactivity |
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| YAN Hui-jun,JIANG Li-fang,FANG Dan-yun,ZHOU Jing-jiao,GUO Hui-yu.Expression of full-length DEN2 NS3 gene in Pichia Pastoris and its immunoreactivity[J].Immunological Journal,2005,21(6):482-484,488. |
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| Authors: | YAN Hui-jun JIANG Li-fang FANG Dan-yun ZHOU Jing-jiao GUO Hui-yu |
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| Institution: | Department of Microbiology, School of Basic Medical Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Dengue type 2 virus NS3 gene Pichia pastoris Gene expression Antibody |
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