糖原合成酶激酶-3β介导心肌营养素-1对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用

目的 研究心肌营养素-1(CT-1)对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用及信号通路.方法 本研究在江西省分子医学重点实验室完成.用改良的方法培养出生1～3 d的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌细胞,根据实验要求分为5组:(1)对照组;(2)缺氧复氧组;(3)缺氧复氧组+CT-1组;(4)缺氧复氧组+CT-1+LY294002组(PIK3/Akt阻断剂);(5)缺氧复氧组+CT-1+助溶剂DMSO组.CT-1的质量浓度为10ng/mL,缺氧3 h,复氧3 h.MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位(△ψm),二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS),流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.心肌细胞磷酸化糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和PI3K蛋白检测用western blotting.以方差分析及q检验进行统计学分析.结果 缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROS较对照组明显增加,而心肌细胞存活率显著降低,线粒体膜电位(△ψm)下降[(40.55±4.25)vs.(86.28±7.15),P<0.01];磷酸化的GSK-3β和PI3K蛋白稍有增加.而CT-1处理的心肌细胞,较缺氧复氧组心肌细胞存活率明显上升(87%),心肌细胞凋亡率及细胞内ROS显著减少,△ψm水平增加,磷酸化GSK-3β及PI3K蛋白水平明显增加.CT-1的作用能被PIK3/Akt阻断剂LY294002抑制,而助溶剂组则未观察到类似作用.结论 CT-1能保护缺氧复氧损伤的心肌细胞,且其作用依赖PI3K/GSK-3β信号通路的激活.