| 以腺相关病毒为载体的小干扰RNA对肝星状细胞中金属蛋白酶组织抑制因子的抑制作用 |
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| 引用本文： | 丛敏,王萍,刘天会,徐雍,卢炎,唐淑珍,刘晓明,王宝恩,贾继东,尤红.以腺相关病毒为载体的小干扰RNA对肝星状细胞中金属蛋白酶组织抑制因子的抑制作用[J].中华微生物学和免疫学杂志,2006,26(11):994-999. |
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| 作者姓名： | 丛敏 王萍 刘天会 徐雍 卢炎 唐淑珍 刘晓明 王宝恩 贾继东 尤红 |
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| 作者单位： | 100050,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30500425）;北京市自然科学基金资助项目（7053066）;北京市科技新星计划项目（20041332）;北京地区高等学校“肝脏保护与再生调节”重点实验室资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 观察以腺相关病毒（AAV）为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1具有较强抑制作用的小干扰RNA（siRNA）感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1的表达抑制作用。方法 针对大鼠TIMP-1mRNA基因序列挑选一段22bp片段，在体外构建为短发夹siRNA（short hairpin siRNA，shRNA）表达载体后，将其包装为重组AAV并感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后，于感染后30d及90d应用荧光定量PCR方法及Westem blot方法分别检测TIMP-1 mRNA及蛋白质表达情况，同时通过PCR技术以感染后细胞的基因组DNA为模板扩增外源基因验证其长效表达。结果 经PCR、酶切及序列测定证实含有siRNA-TIMP-1基因的重组AAV载体质粒已成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞，与对照组细胞相比，感染后30d及90d细胞TIMP-1 mRNA水平明显降低（P〈0．01），感染后30d TIMP-1蛋白表达水平较对照组细胞相比下降约60％，而感染后90d，TIMP-1蛋白表达几乎下降90％。PCR结果显示在重组病毒感染后90d细胞基因组DNA中仍可扩增出外源基因，证实外源基因可长期表达。结论 重组病毒rAAV／siRNA-TIMP-1／neo可长期有效地抑制TIMP-1基因的表达。
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| 关 键 词： | 金属蛋白酶组织抑制因子 小干扰RNA 腺相关病毒 肝星状细胞 |
| 收稿时间： | 2006-02-09 |
| 修稿时间： | 2006年2月9日 |
Suppression of tissue inhibitor of metalloproteinase- 1 (TIMP-1) gene expression by recombinant adeno-associated virus carrying small interfering RNA(siRNA) of TIMP-1 in rat hepatic stellate cell(HSC) |
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| CONG Min,WANG Ping,LIU Tian-hui,XU Yong,LU Yan,TANG Shu-zhen,LIU Xiao-ming,WANG Bao-en,JIA Ji-dong,YOU Hong.Suppression of tissue inhibitor of metalloproteinase- 1 (TIMP-1) gene expression by recombinant adeno-associated virus carrying small interfering RNA(siRNA) of TIMP-1 in rat hepatic stellate cell(HSC)[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2006,26(11):994-999. |
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| Authors: | CONG Min WANG Ping LIU Tian-hui XU Yong LU Yan TANG Shu-zhen LIU Xiao-ming WANG Bao-en JIA Ji-dong YOU Hong |
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| Institution: | Liver Research Center, Beijing Friendship Hospital, Capital University of Medical Sciences, Beijing 100050, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tissue inhibitor of metalloproteinas-1(TIMP-1) Small interfering RNA(siRNA) Adenoassociated virus(AAV) Hepatic stellate cell(HSC) |
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