新预测的Ⅲ型分泌系统毒力蛋白Z3672的基因克隆、表达及纯化 |
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作者姓名: | 高原 马延 毛赟赟 李玉霞 凌焱 张京生 周围 梁龙 |
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作者单位: | 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 |
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摘 要: | 目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌EHEC O157:H7新预测毒力蛋白Z3672,以进一步开展其结构与功能的研究。方法:利用PCR方法从EHECO157:H7基因组中扩增出基因z3672,构建重组表达质粒,经测序证实后,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用质谱分析法和Western印迹试验进行鉴定,通过洗涤包涵体纯化目的蛋白。结果:构建了pET-24a-z3672重组质粒,经酶切及测序鉴定与预期序列一致,实现了目的蛋白的融合表达,并且对蛋白条带的质谱分析证实了表达蛋白即为Z3672蛋白。纯化后目的蛋白的纯度〉90%。结论:得到了新预测的毒力蛋白Z3672,为下一步研究蛋白功能,并进一步研究EHECO157:H7的致病机制奠定了基础。
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关 键 词: | 大肠杆菌O157:H7 z3672基因 基因表达 Ⅲ型分泌系统 |
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