新预测的Ⅲ型分泌系统毒力蛋白Z3672的基因克隆、表达及纯化

目的：克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌EHEC O157：H7新预测毒力蛋白Z3672，以进一步开展其结构与功能的研究。方法：利用PCR方法从EHECO157：H7基因组中扩增出基因z3672，构建重组表达质粒，经测序证实后，在大肠杆菌BL21（DE3）中实现诱导表达，采用质谱分析法和Western印迹试验进行鉴定，通过洗涤包涵体纯化目的蛋白。结果：构建了pET-24a-z3672重组质粒，经酶切及测序鉴定与预期序列一致，实现了目的蛋白的融合表达，并且对蛋白条带的质谱分析证实了表达蛋白即为Z3672蛋白。纯化后目的蛋白的纯度〉90％。结论：得到了新预测的毒力蛋白Z3672，为下一步研究蛋白功能，并进一步研究EHECO157：H7的致病机制奠定了基础。