基于磷脂酰肌醇 3?激酶/蛋白激酶 B信号通路探讨针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤大鼠氧化应激损伤及骨骼肌细胞凋亡的影响

目的探究针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤大鼠氧化应激损伤及骨骼肌细胞凋亡的影响，初步了解针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤的治疗机制。方法于 2018年 12月至 2019年 6月选取 60只 6周龄 SPF级 SD大鼠，采用随机数字表法将 SD大鼠分为四组:空白组(Control，C)、超负荷运动组(Overload，O)、针刺组(Acupuncture，A)和超负荷运动 +针刺组(Overload and Acupuncture，OA)，各 15只； O组及 OA组实行超负荷运动，运动结束立即针刺 A组及 OA组足三里、阳陵泉、内关和肾俞穴，留针 20 min，持续 14 d；检测各组 SD大鼠骨骼肌中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、琥珀酸脱氢酶(SDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH?Px)活性；使用流式细胞仪检测 SD大鼠骨骼肌细胞凋亡情况，使用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase?3)活性；检测 SD大鼠血清中肌酸激酶水平并使用苏木精 ?伊红(HE)染色观察 SD大鼠骨骼肌情况；使用蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇 3?激酶 /蛋白激酶 B(PI3K?Akt)信号通路相关蛋白表达情况。结果相比 C组丙二醛水平(4.75±0.29)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(9.89±1.02)%和肌酸激酶(457.54± 45.02)kU/L，O组丙二醛水平(13.97±0.55)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(32.58±3.50%)、 Bax、Caspase?3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平(1985.50±88.87)kU/L均显著升高(P＜0.05)；相比 C组 GSH?Px水平(142.25±8.39)kU/L、SOD水平(2.50±0.25)kU/L、SDH水平(35.75±8.78)kU/L，O组 GSH?Px水平(55.68±6.97)kU/L、SOD水平(1.02±0.17)kU/L、SDH水平(10.58±6.50)kU/L、Bcl?2、 PI3K、磷酸化蛋白激酶 B(p?AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m?TOR)水平均显著降低(P＜0.05)Akt蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)；相比 O组， A组丙二醛水平(4.99±0.32)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(11.52±1.02)%、B，ax、Caspase?3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平均(557.56±54.25)kU/L显著降低， GSH?Px水平(130.25±7.14)kU/L、SOD水平(2.38±0.30)kU/L、SDH水平(31.25±5.50)kU/L、Bcl?2、PI3K、p?AKT、m?TOR蛋白水平显著升高(P＜0.05)Akt蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)；相比 A组， OA组丙二醛水平(7.89±0.41)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(22.58±2.51)%、B，ax、Caspase?3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平(1402.51±64.50)kU/L均显著升高， GSH?Px水平(135.58±8.14)kU/L、SOD水平(2.10±0.21)kU/L、SDH水平(24.28±4.99)kU/L、 Bcl?2、PI3K、p?AKT、m?TOR蛋白水平显著降低(P＜0.05)，Akt蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)；相比 O组， OA组丙二醛水平、骨骼肌细胞凋亡水平、 Bax、Caspase?3蛋白表达水、血清肌酸激酶平均显著降低， GSH?Px水平、 SOD水平、 SDH水平、 Bcl? 2、PI3K、p?AKT、m?TOR蛋白水平显著升高(P＜0.05)，Akt蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)。 HE染色观察结果显示: O组纤维弯曲，肌红蛋白溶解，肌细胞核固缩、溶解，肌束膜破裂； OA组少量肌纤维断裂溶解弯曲，余未见异常。结论针刺可以通过调控 PI3K?Akt信号通路抑制 SD大鼠氧化应激和骨骼肌细胞凋亡来实现治疗超负荷运动致骨骼肌损伤。