| SIRPα-GFP真核表达载体构建及其在HEK293T细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王明月,王浩,王冬梅,杨泽斌,崔梅英,刘宁,黄莉莉,关新刚.SIRPα-GFP真核表达载体构建及其在HEK293T细胞中的表达[J].吉林大学学报(医学版),2020,46(5):925-929. |
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| 作者姓名： | 王明月 王浩 王冬梅 杨泽斌 崔梅英 刘宁 黄莉莉 关新刚 |
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| 作者单位： | 北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室, 吉林 吉林 132013 |
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| 基金项目： | 吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（20170520140JH，20180101213JC）；吉林省教育厅科学技术研究项目资助课题（JJKH20200033KJ）；吉林省人社厅人才开发资金项目资助课题（201858）；吉林省卫健委卫生计生青年科技骨干培养计划项目资助课题（2017Q040）；吉林省吉林市科技局科技创新发展计划项目资助课题（201831729）；北华大学青年科研创新团队项目资助课题（2017）；北华大学研究生创新计划项目资助课题（北华研创合字〔2019〕061） |
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| 摘 要： | 目的：构建信号调节蛋白α-绿色荧光蛋白（SIRPα-GFP）真核表达载体，转染HEK293T细胞获得稳定表达SIRPα-GFP融合蛋白的细胞系，研究SIRPα-GFP融合蛋白在HEK293T细胞的膜定位。方法：将SIRPα质粒和带有GFP的表达载体分别用限制性内切酶MluⅠ和SgfⅠ进行双酶切，将SIRPα基因克隆到pLenti-GFP载体中，构建pLenti-SIRPα-GFP质粒；将pLenti-SIRPα-GFP质粒转化DH5α大肠杆菌感受态细胞，对重组质粒pLenti-SIRPα-GFP进行DNA测序；采用Lipofectamine 3000转染试剂将pLenti-SIRPα-GFP质粒转染到HEK293T细胞中，通过荧光显微镜观察SIRPα-GFP在稳定转染HEK293T细胞中的表达，采用Western blotting法检测HEK293T细胞中SIRPα-GFP融合蛋白的表达。结果：酶切鉴定和DNA测序，重组质粒pLenti-SIRPα-GFP构建成功。荧光显微镜检测，SIRPα-GFP融合蛋白在HEK293T细胞膜上表达。Western blotting法检测，SIRPα蛋白在pLenti-SIRPα-GFP质粒转染的HEK293T细胞中成功表达。结论：成功构建了pLenti-SIRPα-GFP质粒。通过在HEK293T细胞中转染pLenti-SIRPα-GFP质粒，成功制备了稳定表达SIRPα-GFP的细胞系。SIRPα-GFP蛋白定位于HEK293T细胞的细胞膜上。
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| 关 键 词： | 信号调节蛋白α 绿色荧光蛋白 真核表达载体 细胞转染 |
| 收稿时间： | 2020-02-02 |
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