腺病毒载体介导的大鼠DNA多聚酶β重组体的构建及其在PC12细胞中的表达 |
| |
作者姓名: | 钟建辉 银巍 藏林泉 江伟健 邱鹏新 颜光美 |
| |
作者单位: | [1]中山大学基础医学院药理教研室,广东广州510080 [2]中山大学附属第一医院肾内科,广东广州510080 |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(30472010);广东省自然科学基金研究团队项目(039191) |
| |
摘 要: | 【目的】为探讨DNA多聚酶β在神经细胞损伤中的作用与机制,构建其重组腺病毒载体,并在PC12细胞中表达。【方法】RT—PCR获取大鼠DNA多聚酶β(POLβ)的编码序列,TA克隆测序,酶切POLβ基因并连人穿梭质粒pAdTrack—CMV,电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。重组腺病毒质粒(pAd—polp)和Lipofectamine2000转染293细胞,用重组腺病毒感染PC12细胞。【结果】10个TA克隆中有3个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLβ cDNA序列完全一致,同源重组检测时30个克隆中有8个含目标条带。DNA序列正确的POLβ重组腺病毒质粒转染293细胞后,感染Ad—polβ的293及PC12细胞荧光显微镜下可见绿色荧光,重组腺病毒Ad—polβPCR鉴定含目标条带,Ad—polβ感染PC12细胞Western Blot检测到POLβ蛋白表达。【结论】成功构建了大鼠DNA多聚酶β的腺病毒重组体并在PC12细胞中表达
|
关 键 词: | DNA多聚酶β 腺病毒载体 PC12细胞 |
文章编号: | 1672-3554(2005)06-0622-04 |
收稿时间: | 2005-06-28 |
本文献已被 维普 等数据库收录! |