液相芯片技术快速检测2型糖尿病患者相关降糖药物基因多态性的方法学建立

目的　建立一种可同时、快速检测2型糖尿病患者降糖药相关药物基因多态性的液相芯片检测系统。方法　根据7个目的基因的rs号，在Genbank中查找其靶位点附近碱基序列（目的基因包括磺脲类受体1，转录因子7类似物2，胰岛素受体底物1，过氧化物酶体增殖物激活受体γ，有机阳离子转运蛋白与多药和有毒化合物排出家族，有机阴离子转运蛋白家族成员1B1等），以PrimerPlex 软件设计等位基因特异性引物，Primer6.0 软件设计含检测位点的PCR引物，通过多重PCR扩增，等位基因特异性引物延伸（ASPE），MagPlex～Tag 微球杂交，液相芯片系统 Luminex 200检测荧光信号，确定基因型，优化反应体系并以5份代表性标本进行方法学评价。收集2019年1月~12月东莞市厚街医院新诊2型糖尿病患者血液样本115例，采用建立的系统检测上述7个靶位点，并随机选取25例与测序结果比较。结果　7个目标基因经PCR扩增，产物电泳成像后清楚可见7条目标条带，无非特异性条带；经优化ASPE杂交条件，选择退火温度55℃，Biotion～dCTP浓度与dCTP浓度的比值为3∶1，37℃孵育45 min时检测效果最佳；临床样本检测结果显示:纯合子荧光强度中位值（median fluorescence intensity，MFI）比率均>0.9或<0.1，杂合子MFI比率在0.4~0.6之间。纯合子MFI比率批内批间CV在0.9%~3.3%和2.1%~4.6%，而杂合子则在2.9%~7.3%和5.2%~11.2%；DNA最低检测限为0.75ng；25例样本的检测结果与测序结果完全一致，准确度100%。结论　该研究成功建立了一种新的液相芯片检测系统，高效便捷，能同时检测7个目的基因型，满足临床的需求。

Development of A Liquid Phase Chip Technology for Simultaneous and Rapid Detecting of the Gene Polymorphisms in Medications with Type 2 Diabetes Mellitus