不同浓度维拉帕米及不同光照形式对豚鼠RPE细胞Ca^2＋的影响

目的：探讨不同浓度维拉帕米（verapamil,Ver）对体外培养豚鼠视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞内Ca^2＋浓度的影响,并比较有无Ver作用下经不同形式光照后RPE细胞内Ca^2＋浓度的变化。方法：2周龄幼年健康豚鼠10只,体外培养RPE细胞,传代、鉴定后,将细胞分为Ver处理组和未处理组,Ver处理组加入80mg/L Ver作用12h。两组均进一步分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,前三组分别接受聚焦光、离焦光（均为将平行光经透镜转化）和平行光照射,空白对照组不接受照射。于照射后立即采用激光扫描共焦显微镜（laser scanning confocal microscopy,LSCM）测定细胞内Ca^2＋荧光强度,分析不同光照形式与效应的关系。统计学方法采用单因素方差分析。结果：Ver作用于RPE细胞12h后,20,40,80mg/L组的细胞凋亡情况与空白对照组相比均无统计学意义（P〉0.05）,Ver可降低RPE细胞内Ca^2＋荧光强度,浓度为20,40,80mg/L时分别降低了10.36%,24.54%,58.05%,仅80mg/L组与无光照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。未加Ver对RPE细胞进行光照,聚焦光组的Ca^2＋荧光强度较其他各组明显升高,离焦光组的荧光强度也较高,组间比较有统计学差异（P〈0.05）。加入80mg/LVer对RPE细胞作用12h后再进行光照,光照各组Ca^2＋荧光强度没有明显提高,组间比较没有统计学差异（P〉0.05）。结论：超过一定浓度的Ver可诱导RPE细胞凋亡,80mg/L可在不引起RPE细胞凋亡的前提下有效降低细胞内Ca^2＋荧光强度;不同光照形式对豚鼠RPE细胞内Ca^2＋有明显刺激作用,聚焦光影响最大;不同光照形式对Ver处理的RPE细胞内的Ca^2＋荧光强度无明显作用。