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抗人转化生长因子β1纳米抗体的制备及功能鉴定
引用本文:王玥,李峥,陈慧,张建民,何维.抗人转化生长因子β1纳米抗体的制备及功能鉴定[J].基础医学与临床,2020,40(5):632-638.
作者姓名:王玥  李峥  陈慧  张建民  何维
作者单位:中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 免疫学系,北京100005;北京格根生物科技有限公司,北京100005
基金项目:国家自然科学基金;创新工程项目;国家重点研发计划;中国医学科学院T细胞与免疫治疗重点室项目
摘    要:目的制备并鉴定羊驼来源的高特异性、高亲和力的抗人转化生长因子β1(TGF-β1)的纳米抗体。方法构建真核表达质粒并瞬时转染人胚胎肾上皮细胞HEK-293T,获得重组TGF-β1蛋白;用该蛋白混合弗氏佐剂免疫羊驼,分离外周血单核细胞,提取RNA进行巢式PCR,扩增抗体重链可变区(VHH),并构建VHH噬菌体展示文库;利用ELISA筛选能与TGF-β1重组蛋白特异性结合的抗体株,原核表达并纯化抗TGF-β1的纳米抗体;利用免疫印迹、免疫荧光和ForteBio Octer等方法鉴定纳米抗体的特异性及亲和力。结果成功构建cFUGW-TGF-β1表达载体并纯化了3 mg TGF-β1蛋白;羊驼经过5次免疫后得到容量为1.2×108的TGF-β1-VHH噬菌体展示文库;通过4轮ELISA筛选,得到7株能与重组TGF-β1蛋白特异性结合的抗体株;免疫印迹及免疫荧光实验结果均显示原核表达纯化的TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性识别肺癌细胞系NCI-H520表达的天然TGF-β1;ForteBio Octer结果显示B3、C8与重组TGF-β1的亲和力分别达到1.48×10-9 mol/L、9×10-9 mol/L。结论TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性结合TGF-β1,特异性强、亲和力高,或可开发用于肿瘤的免疫治疗。

关 键 词:人转化生长因子β1  纳米抗体  噬菌体展示文库
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