人参皂甙单体Rh2诱导髓性白血病细胞株凋亡的时效与量效★

目的：已发现人参中某些有效组分能增强和激活机体免疫系统，具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性作用。选取人髓性白血病细胞株HL60为模型，探讨人参皂甙单体Rh2抑制其增殖和诱导凋亡的时效量效关系。方法：实验于2006-07/08在吉林医药学院临床检验实验室进行。①材料：人参皂甙单体Rh2购自吉林省宏久生物科技股份有限公司，批号050801，溶于pH 7.4磷酸盐缓冲液中配成50 g/L母液。人髓性白血病细胞株HL60购自中国科学院上海生物细胞研究所。②实验方法：取处于对数生长期的HL60细胞制备3×108 L-1细胞悬液，接种后6 h分别加入终浓度为5，10，20，40，80 mg/L的人参皂甙单体Rh2 100 μL，于加药48 h后采用MTT比色法检测人参皂甙单体Rh2对HL60细胞生长的抑制作用，计算抑制率和半数抑制浓度。选择半数抑制浓度的人参皂甙单体Rh2处理HL60细胞，分别于作用6，12，24，48，72 h后采用MTT比色法测定抑制率，并与未加药对照组进行比较。半数抑制浓度的人参皂甙单体Rh2作用48 h时倒置显微镜下观察HL60细胞形态，吉姆萨染色观察细胞凋亡情况。结果：①量效关系：人参皂甙单体Rh2浓度为5，10，20，40 mg/L时，处理48 h后HL60细胞生长抑制率呈升高趋势（F=9.45，P < 0.01），具有明显的剂量依赖性；至80 mg/L时抑制率与40 mg/L基本相似。加药48 h后半数抑制浓度为13.0 mg/L。②时效关系：13.0 mg/L人参皂甙单体Rh2处理HL60细胞6，12，24，48，72 h后，抑制率逐渐升高（F=9.32，P < 0. 01），呈时间依赖性。③HL60细胞形态观察：与未加药对照组比较，经13.0 mg/L人参皂甙单体Rh2处理后HL60细胞数量明显减少，细胞分散，体积缩小，细胞核呈碎片状。④凋亡细胞吉姆萨染色检测：经13.0 mg/L人参皂甙单体Rh2处理后，HL60细胞出现核染色质浓缩、呈周边凝聚，核膜裂解形成凋亡小体、胞质出现空泡但胞膜完整的典型细胞凋亡形态学改变。结论：人参皂甙单体Rh2能有效抑制体外培养HL60细胞的增殖，并诱导其凋亡，干预效果呈时间和剂量依赖。

Effect of ginsenoside-Rh2 on the apoptosis in myeloid leukemia cell strain: Dose- and time-dependent manners