| 重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 高全文,柳春明,宋慧锋,柴家科.重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达[J].解放军医学杂志,2009,34(2). |
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| 作者姓名： | 高全文 柳春明 宋慧锋 柴家科 |
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| 作者单位： | 1. 解放军总医院第一附属医院烧伤整形科,北京,100037
2. 解放军总医院整形外科 |
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| 摘 要： | 目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),并观察Ad-VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(bMSCs)后VEGF165的表达情况. 方法 将PCR获取的VEGF165目的 基因插入到pAATrackCMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-VEGF165,经Pme I酶切线性化后,采用电穿孔法转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中,挑选同源重组菌落.提取质粒并用Pac I酶切鉴定.线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞,包装成重组腺病毒颗粒.并扩增收集重组腺病毒,测定病毒滴度.体外培养大鼠骨髓基质细胞,Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞,转染后在荧光显微镜下观察.转染的骨髓基质细胞采用RT-PCR和ELISA法检测VFGF165的表达水平. 结果 经酶切鉴定,基因测序及绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒,并扩增出109pfu/ml的高滴度重组腺病毒.Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞后,RT PCR证明转染的骨髓基质细胞内有VEGF165mRNA表达.ELISA检测发现转染组上清液中VEGF165蛋白分泌量明显高于对照组(P＜0.01). 结论 pAdEasy-VEGF165转染对骨髓基质细胞的增殖能力无明显影响,而且骨髓基质细胞能够表达并分泌VFGF165为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 腺病毒科 血管内皮生长因子类 骨髓基质细胞 基因疗法 |
Expression of recombinant adenovirus-mediated VEGF165 in bone marrow stromal cells of rats |
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| GAO Quan-wen,LIU Chun-ming,SONG Hui-feng,CHAI Jia-ke.Expression of recombinant adenovirus-mediated VEGF165 in bone marrow stromal cells of rats[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2009,34(2). |
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| Authors: | GAO Quan-wen LIU Chun-ming SONG Hui-feng CHAI Jia-ke |
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