银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠学习记忆及海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响

背景：研究表明，银杏叶提取物具有促进脑损伤后功能修复、改善老年人学习与记忆功能障碍以及促进中枢神经系统可塑性的作用，但其对2型糖尿病大鼠学习记忆功能的影响又如何呢？目的：观察银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠学习记忆功能障碍的改善作用和对海马内星形胶质细胞特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白表达的影响。设计：完全随机分组设计，对照实验。单位：广西医科大学药学院药理学教研室。材料：选用84只雄性清洁级Wistar大鼠，8周龄，体质量180-220g。银杏叶提取物粉，广西桂林思特新技术公司提供，含黄酮24．8％，萜内酯6．2％，生产批号：200405。方法：实验于2003—06／2005—03在广西医科大学中心实验室（省重点实验室）药理室完成。④随机抽取70只大鼠，禁食24h，按55mg／kg腹腔注射链脲佐菌素（pH4．4柠檬酸缓冲液配制），注射后第4天，空腹血糖〉15mmol／L的56只为2型糖尿病大鼠。①将56只糖尿病大鼠按随机数字表法分为4组：模型组，胰岛素治疗组，银杏叶提取物高、低剂量组，每组14只。4组糖尿病大鼠的空腹血糖差异不明显（P〉0．05）。另取未注射链脲佐菌素的大鼠14只作正常对照组。胰岛素治疗组：皮下注射10U／（kg&;#183;d）；银杏叶提取物高、低剂量治疗组：灌胃银杏叶提取物混悬液100和500mg／（kg&;#183;d）；正常对照组和模型组：每天灌胃等量生理盐水，连续6个月。③Morris水迷宫实验观察记忆能力改变：圆形水池直径为100cm，高60cm，平台高40cm，水深42cm。大鼠每天上、下午各训练2次，连续4d。第5和8天上午测定每只大鼠学习能力[90s内找到平台的时间（逃避潜伏期）；搜寻平台的策略直线式，记分4分；趋向式，记分3分；随机式，记分2分；圆圈式，记分1分）1。④测试结束后，各组取大鼠分别进行反转录聚合酶链反应（n=8）及免疫组织化学（n=6）实验，观察大鼠海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白的表达，分别以目的基因胶质纤维酸性蛋白区带的灰度值与内参β-actin区带的灰度值之比和胶质纤维酸性蛋白反应阳性细胞的体密度比表示。⑤组间差异显著性比较采用方差分析和q检验。主要观察指标：银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠Morris水迷宫实验结果及海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达的影响。结果：造模失败脱失14只，其余70只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫实验结果：模型组大鼠第5，8天的逃避潜伏期明显长于正常对照组，搜寻平台策略得分明显低于正常对照组（P〈0．01）。胰岛素治疗组及银杏叶提取物高、低剂量组的第5，8天逃避潜伏期均明显短于模型组，搜寻平台策略得分明显高于模型组（P〈0．05-0．01）。胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组Morris水迷宫实验结果差异不明显（P〉0．05）。②海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达：模型组大鼠海马的胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平明显高于其他3组（P〈0，01）。免疫组化结果显示，与正常对照组比较，模型组大鼠海马星形胶质细胞胞体明显增大、数量增加、突起明显增粗，胶质纤维酸性蛋白阳性表达细胞的体密度比明显增高（P〈0．01）。与模型组比较，胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组海马星形胶质细胞胞体缩小、数量减少、突起明显变短，胶质纤维酸性蛋白表达的体密度比明显下降（P〈0．01）。胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平和胶质纤维酸性蛋白表达的体密度比比较，差异不明显（P〉0．05）。结论：2型糖尿病大鼠存在学习记忆能力障碍，反应性星形胶质细胞可能参与了该障碍发生过程，银杏叶提取物可能通过抑制星形胶质细胞反应性增生对糖尿病大鼠学习记忆损伤起到保护作用。

Effects of Gingko biloba leaf extract on the learning and memory and expression of glial fibrillary acidic protein in hippocampal astrocytes of type 2 diabetic rats