| 破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2的真核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 吴素霞,柴立辉,王战争,刘广超,田文志,马远方.破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2的真核表达及多克隆抗体制备[J].中国免疫学杂志,2014(10). |
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| 作者姓名： | 吴素霞 柴立辉 王战争 刘广超 田文志 马远方 |
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| 作者单位： | 抗体药物河南省工程实验室，河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室，开封 475004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目( No.30972687)资助。 |
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| 摘 要： | 目的：为了获得真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和OCILRP2特异性抗体，用于OCILRP2生物学功能的进一步研究。方法：构建了融合人IgG Fc段的小鼠OCILRP2真核表达载体pIg-CD5-OCILRP2，将pIg-CD5-OCILRP2转染CHO细胞，G418筛选稳定表达细胞株；Protein A 亲和层析从 CHO 细胞培养上清中纯化重组蛋白OCILRP2-Fc 并免疫家兔制备OCILRP2多克隆抗体。 ELISA检测抗血清和多克隆抗体的效价，Western blot 验证多克隆抗体的特异性，并应用该抗体检测OCILRP2在树突状细胞（ Dendritic cells ，DC）中的表达。结果：ELISA结果表明OCILRP2-Fc稳定表达细胞株经过多次传代培养后仍然具有较高的蛋白表达水平；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化后的蛋白只有单一条带出现，且该条带可以被抗人IgG检测到；重组蛋白OCILRP2-Fc免疫家兔获得的抗血清和纯化后得到的OCILRP2多克隆抗体效价分别为1∶1280000和1∶320000，Western blot证明该抗体可以和免疫原OCILRP2-Fc及NIH/3T3细胞中表达的OCILRP2特异性结合。应用该抗体检测OCILRP2在 DC 的表达发现 OCILRP2在成熟 DC 的表达明显高于不成熟 DC。结论：获得了真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和高效价的OCILRP2特异性抗体，为进一步研究OCILRP2在免疫应答中的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | C型凝集素相关蛋白 真核表达 多克隆抗体 树突状细胞 |
Eukaryotic expression and preparation of polyclonal antibody for osteoclast inhibitory lectin related protein |
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| WU Su-Xia,CHAI Li-Hui,WANG Zhan-Zheng,LIU Guang-Chao,TIAN Wen-Zhi,MA Yuan-Fang.Eukaryotic expression and preparation of polyclonal antibody for osteoclast inhibitory lectin related protein[J].Chinese Journal of Immunology,2014(10). |
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| Authors: | WU Su-Xia CHAI Li-Hui WANG Zhan-Zheng LIU Guang-Chao TIAN Wen-Zhi MA Yuan-Fang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | C-type lectin-related protein Eukaryotic expression Polyclonal antibody Dendritic cell |
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