蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡影响的研究

目的 :探究蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(FLS-RA)凋亡的影响。方法 :原代培养FLS-RA,MTT法测定蜂毒注射液对细胞增殖及细胞毒性作用,hoechst染色法观察凋亡小体,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果:组织块培养法培养2周后细胞向心性排列,呈梭形及三角形。经过3~5次传代,FLS-RA细胞逐渐纯化,以FLS为主(>95%),体外生长稳定。倒置相差显微镜观察细胞形态:细胞排列整齐,向心性排列,呈梭形或三角形,偶见圆形细胞,细胞核成卵圆形,居细胞中央,胞质均匀透亮。干预24 h:各组生存率低于空白对照组(P<0.05),浓度越高,生存率越低;蜂毒注射液处理48 h:各组生存率低于空白对照组(P<0.05),浓度越高,生存率越低;同浓度蜂毒注射液处理24 h生存率与48 h比较:48 h组小于24h组(P<0.05)。利用ORIGIN 5.0软件计算蜂毒注射液的半数抑制浓度(IC50)为(16.79±0.13)mg/L。实验组与阳性对照组中凋亡小体形态相似,细胞核呈致密浓染,颜色发白,而阴性对照组未见明显凋亡小体,细胞核未见固缩的染色质。B1区为细胞碎片,B2区为晚期凋亡和死亡的细胞,B3区为正常细胞,B4区为早期凋亡的细胞。由于B2区包含死亡的细胞,多选择B4区比较早期凋亡率。低浓度组蜂毒注射液作用FLS-RA细胞24 h,早期凋亡率大于空白对照组(P<0.05);高浓度组蜂毒注射液早期凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01),且大于低浓度组(P<0.05)。结论:蜂毒注射液可诱导成纤维样滑膜细胞凋亡,这可能是蜂毒治疗类风湿关节炎的机理之一。