腺病毒介导的双荧光素酶报告系统的构建及其应用

目的： 构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统，并利用其筛选一种广谱高活性启动子。方法：将待检测启动子控制的萤火虫荧光素酶（Fluc）基因表达框插入腺病毒E1区，CMV启动子控制的海肾荧光素酶（Rluc）基因表达框插入E3区作为内参，构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统。检测不同病毒感染量条件下测得的启动子活性数据差异、组内差异，难转染细胞内的转染情况，分析该系统的操作简便性、稳定可靠性。应用该系统检测常用启动子CAG、CASI及新启动子CCAU在一系列细胞内的活性，从中筛选出一种广谱高活性启动子。结果： 成功构建了腺病毒介导的双荧光素酶报告系统；不同MOI值下测得的各启动子相对活性值无显著差异（P>0.05）；在所实验的细胞内均能有效且准确地测定各启动子的活性，且复孔间方差小；CCAU在所实验的9株细胞中的表达活性显著（P<0.05）或极显著地（P<0.01）高于CASI以及CAG的表达活性。结论： 构建获得的腺病毒介导双荧光素酶报告系统操作简便、稳定可靠、通用性强，可作为启动子活性筛选的一种新方法；利用该系统筛选获得了一种新的广谱高活性启动子CCAU。