人YB-1蛋白的高效原核表达、纯化及其多抗的制备 |
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引用本文: | 李朴,孔飞飞,余雪梅,成凤,涂植光.人YB-1蛋白的高效原核表达、纯化及其多抗的制备[J].第三军医大学学报,2010,32(14). |
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作者姓名: | 李朴 孔飞飞 余雪梅 成凤 涂植光 |
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作者单位: | 重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆,400016 |
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摘 要: | 目的 构建YB-1原核表达系统,诱导表达后纯化YB-1融合蛋白并制备其多抗.方法 采用RT-PCR扩增YB-1编码序列,将该序列克隆至载体pET-32a(+);转化BL21(DE3),确定最佳表达条件;采用亲和层析与超滤纯化目的 蛋白,经Western blot鉴定后免疫家兔,制备其抗体.结果 成功扩增YB-1编码序列并构建了其表达载体;SDS-PAGE结果显示,表达条件经优化后(28 ℃, 5 h, 0.5 mmol/L IPTG),YB-1融合蛋白在BL21中得到高效可溶性表达;Western blot结果证实,表达产物经纯化后获得了纯度较高的YB-1融合蛋白,将该蛋白免疫家兔后获得了效价与特异性较高的抗体.结论 成功建立了YB-1蛋白的原核表达系统及蛋白纯化方法,并制备了其抗体.
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关 键 词: | 原核表达 亲和层析 多抗制备 |
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