| 应用腺病毒载体介导RNA干扰技术构建糖皮质激素受体基因阻断的人U937巨噬细胞模型 |
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| 引用本文： | 张方,辛晓峰,施毅,刘玉秀,钱桂生,罗向东,赵明,李子玲.应用腺病毒载体介导RNA干扰技术构建糖皮质激素受体基因阻断的人U937巨噬细胞模型[J].中国临床康复,2006,10(29):89-91,i0003. |
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| 作者姓名： | 张方 辛晓峰 施毅 刘玉秀 钱桂生 罗向东 赵明 李子玲 |
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| 作者单位： | [1]解放军南京军区南京总医院呼吸内科,江苏省南京市210002 [2]解放军南京军区南京总医院科研科,江苏省南京市210002 [3]解放军第三军医大学新桥医院呼吸研究所,重庆市400037 [4]解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所,重庆市400040 |
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| 摘 要： | 目的：利用腺病毒载体介导的RNA干扰技术，建立糖皮质激素受体基因阻断的人U937巨噬细胞模型。
方法：实验于2004-06／2005-05在解放军第三军医大学新褫医院呼吸研究所实验室完成。将针对糖皮质激素受体发挥RNA干扰效应的合成寡核苷酸序列连入含有绿色荧光蛋白基因的腺病毒穿梭质粒pRNAT-H1.1／Adeno中，在含有pAdEasy-1病毒骨架的BJ5183大肠杆菌内进行同源重组；重组予通过脂质体介导转染293T细胞，并在293T细胞内包装为具有感染能力的病毒颗粒，通过反复感染扩增病毒以达到感染靶细胞的适当滴度，通过绿色荧光表达来监控腺病毒扩增；应用Western blot法检测U937巨噬细胞感染后糖皮质激素受体蛋白的表达。
结果：转染腺病毒载体的293T细胞表达绿色荧光，随着时间逐渐增强，并且出现明显的细胞病变效应，经过3轮扩增，病毒达到合适的滴度。受腺病毒感染的U937巨噬细胞内糖皮质激素受体蛋白表达明显降低。
结论：可以成功构建针对糖皮质激素受体基因的RNA干扰腺病毒载体。
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| 关 键 词： | 受体 糖皮质激素 腺病毒科 基因 转录 遗传 |
| 文章编号： | 1671-5926（2006）29-0089-03 |
| 收稿时间： | 01 6 2006 12:00AM |
| 修稿时间： | 2006-01-062006-01-25 |
Construction of glucocorticoid receptor gene block model in human macrophage U937 with RNA interference mediated by adenovirus vector |
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| Zhang Fang, Xin Xiao-feng, Shi Yi, Xiang-dong, Zhao Ming, Li Zi-ling.Construction of glucocorticoid receptor gene block model in human macrophage U937 with RNA interference mediated by adenovirus vector[J].Chinese Journal of Clinical Rehabilitation,2006,10(29):89-91,i0003. |
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| Authors: | Zhang Fang Xin Xiao-feng Shi Yi Xiang-dong Zhao Ming Li Zi-ling |
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| Institution: | 1.Department of Respiratory Medicine, 2.Department of Scientific Research, Nanjing General Hospital of Nanjing Military Area Command of Chinese PLA, Nanjing 210002, Jiangsu Province, China; 3.Institute of Respiratory Diseases, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University of Chinese PLA, Chongqing 400037, China; 4.Burn Institute, Southwest Hospital, Third Military Medical University of Chinese PLA, Chongqing 400040, China |
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| Abstract: | |
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