苓桂术甘汤促进星形胶质细胞内化降解β淀粉样蛋白机制

目的 通过观察苓桂术甘汤（LGZGT）含药血清对β淀粉样蛋白1-42（Aβ_1-42）诱导大鼠原代星形胶质细胞（AS）阿尔茨海默病（AD）病理模型的影响，探讨LGZGT对Aβ的吞噬及降解作用。方法 以Aβ_1-42诱导AS建立AD模型，实验分为正常组、模型组、LGZGT低、中、高剂量（LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H）含药血清组（1.2、2.4、4.8 g·kg^-1）、盐酸多奈哌齐含药血清组（0.5 mg·kg^-1），模型组加入Aβ_1-42，终浓度为10 μmol?L^-1，LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组在模型组的基础上均加入10%的含药血清。通过细胞增殖活力检测（CCK-8）试剂盒检测各组细胞活力；乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测各组细胞LDH活力；用倒置显微镜观察各组细胞形态；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Aβ相关降解酶胰岛素降解酶（IDE）、组织蛋白酶D（CTSD）的表达；采用免疫荧光法测定组织蛋白酶B（CTSB）的荧光强度；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞Aβ_1-42含量。结果 与空白组比较，各组AS活力下降，且不同浓度的Aβ_1-42对AS的增殖具有抑制作用；给药后，与正常组比较，模型组的细胞存活率明显降低（P<0.05）；与模型组比较，LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞存活率明显增加（P<0.05，P<0.01）；与正常组比较，模型组的细胞的LDH活力明显升高（P<0.05），且细胞胞体肥大肿胀，突起增多且延长，细胞相互聚集成团，提示细胞损伤较为明显；与模型组比较，盐酸多奈哌齐、LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组细胞LDH活力显著降低（P<0.01）；给药后，LGZGT-M组、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞胞体肿胀有所改善，细胞突起短，细胞聚集结团减少；与正常组比较，模型组IDE、CTSD的表达明显降低（P<0.05）；与模型组比较，LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组能够明显上调IDE的表达（P<0.05）；与模型组比较，LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组均能明显上调CTSD的表达（P<0.01）；与正常组比较，模型组的CTSB的平均荧光强度明显降低（P<0.05），与模型组比较，LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组CTSB平均荧光强度增强（P<0.05，P<0.01）；与正常组比较，模型组的细胞胞内Aβ_1-42含量升高（P<0.05）；给药后，与模型组比较，LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞胞内Aβ_1-42含量显著降低（P<0.01），LGZGT含药血清以剂量依赖性的形式降低Aβ_1-42。结论 LGZGT对Aβ_1-42诱导的AS具有保护作用，还可促进Aβ的降解，其机制可能与减轻Aβ毒性，增强细胞活力，促进IDE、CTSD、CTSB的表达及恢复溶酶体的功能相关。