| RNA干扰沉默DDX1基因的胶质瘤细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 连海伟,周筠,崔红霞. RNA干扰沉默DDX1基因的胶质瘤细胞系的建立[J]. 中国临床药理学杂志, 2018, 0(23): 2711-2714 |
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| 作者姓名： | 连海伟 周筠 崔红霞 |
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| 作者单位： | 武汉大学人民医院神经外科;齐齐哈尔医学院药学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金资助项目(81302308) |
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| 摘 要： | 目的以短发夹核糖核酸(RNA)慢病毒载体建立DEAD-box解旋酶1(DDX1)基因稳定沉默的胶质母细胞瘤细胞株。方法针对DDX1基因设计2组短发夹RNA序列,退火形成的双链DNA与线性p LKO. 1-puro-e GFP质粒载体连接,构建慢病毒质粒载体,测序正确后进行慢病毒包装;将获得的重组慢病毒转染人胶质瘤U251细胞,转染细胞分为对照组和干扰组,对照组转染对照慢病毒(sh NC);干扰组转染慢病毒载体p LKO. 1-puro-e GFP-shRNA-DDX1(sh DDX1-1,sh DDX1-2)。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,进行嘌呤霉素抗性筛选;用实时定量聚合酶链式反应(PCR)、蛋白免疫印迹法检测转染后U251细胞中DDX1 mRNA及蛋白表达。结果测序证实成功构建对照组和靶向DDX1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,病毒悬液滴度均> 3×10~8TU·m L-1。荧光显微镜下观察显示,对照组和干扰组转染效率高于85%;嘌呤霉素筛选后,干扰组sh DDX1-1、sh DDX1-2中DDX1 mRNA的抑制率分别为85. 44%和71. 66%,DDX1蛋白表达水平分别下降了99. 1%和96. 7%,均较对照组(100%)显著降低(均P <0. 01)。结论成功构建沉默DDX 1基因的胶质瘤细胞系,为研究DDX1对胶质瘤生物学行为的影响提供细胞模型。
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| 关 键 词： | DDX1基因 RNA干扰 慢病毒 胶质瘤 |
Establishment of stable glioma cell line with DDX1 gene silencing by RNA interference |
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| LIAN Hai-wei,ZHOU Yun,CUI Hong-xia. Establishment of stable glioma cell line with DDX1 gene silencing by RNA interference[J]. The Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 0(23): 2711-2714 |
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| Authors: | LIAN Hai-wei ZHOU Yun CUI Hong-xia |
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| Affiliation: | (Department of Neurosurgery,Wuhan University Renmin Hospital, Wuhan 430060,China;School of Pharmacy, Qiqihaer Medical University, Qiqihar 161006,Heilongjiang Province,China) |
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| Abstract: | LIAN Hai-wei;ZHOU Yun;CUI Hong-xia(Department of Neurosurgery,Wuhan University Renmin Hospital, Wuhan 430060,China;School of Pharmacy, Qiqihaer Medical University, Qiqihar 161006,Heilongjiang Province,China) |
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| Keywords: | DDX1 gene RNA interference lentivirus glioma |
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