| 两种巢式PCR法检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的灵敏度评价 |
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| 引用本文： | 杨芳芳,张小娟,王鸽,欧阳颐,林睿,黎学铭. 两种巢式PCR法检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的灵敏度评价[J]. 应用预防医学, 2012, 18(1) |
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| 作者姓名： | 杨芳芳 张小娟 王鸽 欧阳颐 林睿 黎学铭 |
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| 作者单位： | 1. 广西壮族自治区疾病预防控制中心,南宁,530021
2. 广西医科大学寄生虫教研室,南宁,530021 |
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| 基金项目： | 广西人事厅留学回国人员基金项目,广西科技厅重点项目,广西科技厅科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的 对ITS1-5.8S rRNA-ITS2 巢式PCR 法与mtLSUrRNA 巢式PCR 法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性进行评价.方法 把大鼠随机分为7 组(6 组实验组,1 组对照组),每组10 只,采用地塞米松免疫抑制法诱导实验组大鼠感染肺孢子虫;自第3 周开始每周剖杀1 组实验鼠,收集第3 周至第8 周实验组大鼠肺组织(LT,lung tissue) 和支气管肺泡灌洗液(BALF,bronchoalveolar lavage fluid) 标本.同时采用镜检法、ITS1-5.8S rRNA-ITS2 巢式PCR 法和mtLSUrRNA 巢式PCR 法对大鼠LT 和BALF 标本进行检测,并对结果 进行统计学分析.结果 采用GMS 染色镜检法于第5 周开始检出肺孢子虫包囊,第6、7 周包囊数最多.采用ITS1-5.8S rRNA-ITS2-巢式PCR 法和mtLSUrRNA 巢式PCR 法对实验感染大鼠LT 和BALF 进行检测,前者卡氏肺孢子虫阳性率分别为第3 周20% (2/10)和0(0/10);第4 周70%(7/10)和10%(1/10);第5 周90%(9/10)和30%(3/10);第6 周90%(9/10)和80%(8/10);第7 周100%(10/10)和80%(8/10);第8 周40%(5/8)和40%(5/8).后者卡氏肺孢子虫阳性率分别为第3 周100% (10/10)和100(10/10);第4 周100%(10/10)和80%(8/10);第5 周100%(10/10)和50%(5/10);第6 周90%(9/10)和100%(10/10);第7 周100%(10/10)和80%(8/10);第8 周100%(8/8)和87.5%(7/8).经χ2检验,在大鼠无明显症状阶段(3~4w)时,两种巢式PCR 方法 检测敏感性差异有统计学意义.有明显症状阶段(5~8wq)时,其敏感性差异无统计学意义;同时统计学分析显示不同来源的标本对不同方法 敏感性不同,采用mt-LSU 巢式PCR 检测时,LT和BALF标本敏感性差异无统计学意义,采用ITS-巢式PCR检测时,对LT检测的敏感性更高.结论 mtLSU-巢式PCR 法检测实验大鼠中检出卡氏肺孢子虫敏感性高于ITS1-5.8S rRNA-ITS2-巢式PCR 法.
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| 关 键 词： | 卡氏肺孢子虫 线粒体核糖体大亚基RNA 基因(mtLSU) 内转录间隔区(ITS) 5.8S 核糖体RNA 基因(5.8Sr RNA)巢式PCR |
Evaluation of sensitivity of two nested PCR methods in detection of Pheumocystis carinii in experimental rat |
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