Tet-on系统调控的人端粒酶催化亚单位基因腺病毒表达载体的构建和鉴定

目的构建和鉴定Tet-on系统调控的人端粒酶催化亚单位基因腺病毒表达载体。方法用EcoRⅠ从pGRN145质粒上切下约3.5kb的人端粒酶全长cDNA片段,然后连于pTRE-shuttle2质粒的EcoRⅠ酶切位点,经EcoRⅠ酶切鉴定。亚克隆重组质粒片段于腺病毒载体Adeno-XTM,构建重组Adeno-X-hTERT,以PI-SceⅠ和I-CeuⅠ双酶切、聚合酶链反应(PCR)以及进一步测序鉴定其方向。结果重组质粒经EcoRⅠ酶切后得到预期的3.5、0.88、3.55kb大小的3条片段,重组腺病毒载体经PI-SceⅠ和I-CeuⅠ双酶切,出现预期32.6、5.09kb片段,与理论计算值完全一致,PCR及测序结果进一步确认了结构与方向的正确性。结论成功构建了Tet-on系统调控人端粒酶催化亚单位基因hTERT的重组腺病毒表达载体。