siRNA沉默PPARα减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡 |
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引用本文: | 童锦禄,郑青,徐锡涛,陈翔,朱明明,聂芳,冉志华,萧树东.siRNA沉默PPARα减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡[J].胃肠病学,2010,15(5):275-279. |
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作者姓名: | 童锦禄 郑青 徐锡涛 陈翔 朱明明 聂芳 冉志华 萧树东 |
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作者单位: | 上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科,上海市消化疾病研究所,200001 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助面上项目,上海市科委重点实验室项目 |
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摘 要: | 背景:多药耐药一直是遏制提高结肠癌化疗有效性的瓶颈问题。目的:探讨沉默PPARα能否减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡,从而阐明PPARα在羟喜树碱耐药中的潜在作用。方法:构建针对PPARα基因的siRNA干扰载体,并转染人结肠癌SW1116细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞,以RT-PCR和蛋白质印迹法验证干扰效果。经羟喜树碱干预后,以MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡。以定量RT-PCR检测不同浓度miR-506前体转染SW1116细胞后对PPARα下游调控靶基因mRNA表达的影响。结果:siRNA干扰载体Ⅲ的沉默效果最佳,PPARα mRNA和蛋白表达分别下调了约94.1%±3.4%和70.8%±8.6%。稳定转染siRNA的SW1116细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(332±19)μg/L,亲本SW1116细胞为(152±12)μg/L。在相同浓度羟喜树碱的作用下,亲本SW1116细胞的凋亡率显著高于稳定转染siRNA的SW1116细胞(150μg/L:7.0%±2.5%对2.8%±1.6%;300μg/L:32.4%±7.1%对18.5%±2.7%)。miR-506前体下调HMGCS-2表达,上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达,其中上调CCND1的作用最为明显。结论:成功构建了针对PPARα的siRNA干扰载体;沉默PPARα能增强SW1116细胞对羟喜树碱的抵抗性,可能与下调HMGCS-2表达并上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达有关。
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关 键 词: | RNA 小分子干扰 PPARα 羟喜树碱 结肠肿瘤 细胞凋亡 |
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