华支睾吸虫排泄-分泌产物对小鼠巨噬细胞一氧化氮产生和核转录因子κB活化的影响

目的研究华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)排泄-分泌产物(ESPs)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7一氧化氮(NO)产生与核转录因子κB(NF-κB)活化的影响。方法用20μg/ml华支睾吸虫ESPs水溶性浓缩物及其有机溶剂提取物(ESPs-ex)和0.1μg/ml明尼苏达沙门氏杆菌脂多糖(LPS-SM)分别刺激RAW264.7细胞,未刺激对照组加入等量Hank’s平衡盐缓冲液(HBSS)。实验同时用0.3 mmol/L诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)抑制剂SMT作为干预。细胞培养18 h后,用Griess法检测各组细胞培养上清液NO2-浓度。将p Ni Fty2-SEAP质粒转染至4组刺激后RAW264.7细胞,培养18 h后,检测培养上清液中可溶性胚胎碱性磷酸酶(SEAP)的吸光度(A620值),倒置显微镜观察细胞内SEAP催化显色情况。结果经ESPs-ex和LPS-SM刺激后,细胞培养上清液中NO2-浓度分别为(14.30±1.62)和(14.10±2.17)μmol/L,均较未刺激对照组[(7.70±0.95)μmol/L]显著增加(P0.05);加入SMT后,两组NO2-浓度显著下降,分别为(8.97±0.81)和(4.96±1.36)μmol/L(均P0.05)。经ESPs刺激后,上清液中NO2-浓度为(4.06±0.62)μmol/L,较未刺激对照组显著降低(P0.05);加入SMT后,NO2-浓度为(3.99±0.87)μmol/L,无明显变化(P0.05)。ESPs刺激后,上清液SEAP的A620值为0.836±0.005,显著高于未刺激对照组(0.097±0.009)(P0.05);镜下可见细胞内出现广泛、强烈的蓝色显色反应。ESPs-ex和LPS刺激后,上清液SEAP的A620值分别为0.112±0.004和0.116±0.009,略高于未刺激对照组(P0.05);镜下见部分细胞内出现蓝色显色反应。结论华支睾吸虫ESPs能够促进RAW264.7细胞活化NF-κB,其水溶性浓缩物可抑制NO产生,ESPs-ex和LPS-SM可促进NO产生。